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Se usa una molécula recombinante de captura para el diagnóstico de una enfermedad viral

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 23 Apr 2019
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Imagen: El lector de placas SPECTROstar Nano Absorbance con puerto para celdas (Fotografía cortesía de BMG Labtech).
Imagen: El lector de placas SPECTROstar Nano Absorbance con puerto para celdas (Fotografía cortesía de BMG Labtech).
La fiebre hemorrágica de Crimea-Congo (CCHF, por sus siglas en inglés) es una enfermedad infecciosa endémica en una variedad de países del sureste de Europa, Medio Oriente, Asia y África. La transmisión del virus (CCHFV) se produce a través de la picadura de una garrapata infectada y también por contacto cercano con fluidos corporales de personas infectadas o ganado.

El virus Zika (ZIKV) es un arbovirus que pertenece al género Flavivirus y la infección es posterior a la picadura de un mosquito Aedes infectado y se presenta con síntomas leves de una enfermedad tipo gripe; la infección asintomática es frecuente. Una infección por ZIKV que se produce durante el primer trimestre del embarazo aumenta significativamente la probabilidad de que el feto desarrolle microcefalia, una malformación cerebral grave e incapacitante.

Un equipo internacional de científicos que trabaja con el Instituto de Medicina Tropical Bernhard Nocht (Hamburgo, Alemania), ha demostrado el potencial del dominio similar a inmunoglobulina extracelular expresado en bacterias del FcμR humano (HsFcμR-Igl) como una molécula de captura para pruebas serológicas específicas de IgM. Como sistemas modelo, eligieron dos patógenos virales, el CCHFV y el ZIKV. En 2015, la Organización Mundial de la Salud (OMS, Ginebra, Suiza) identificó a ambos como patógenos emergentes de alto riesgo que probablemente causen epidemias importantes y que, por lo tanto, necesiten atención urgente de investigación y desarrollo.

El HsFcμR-Igl etiquetado con His se expresó en Escherichia coli y se purificó por cromatografía de afinidad, replegamiento oxidativo y cromatografía de exclusión por tamaño. Se confirmó la unión específica de HsFcμR-Igl a los complejos inmunes (CI) de IgM/antígeno y se desarrollaron dos ensayos prototípicos inmunoenzimáticos (ELISA) para la detección de anticuerpos IgM anti-CCHFV y anti-ZIKV. De este modo, los sueros de pacientes y los antígenos recombinantes específicos de virus marcados directamente con peroxidasa de rábano picante (HRP) se incubaron conjuntamente en placas ELISA recubiertas con HsFcμR-Igl. Los CI unidos se cuantificaron midiendo la transformación de un sustrato de HRP cromogénico. Para todos los ELISA, el producto de reacción HRP se cuantificó midiendo la absorbancia (A) a 450 nm y 620 nm en un lector Spectrostar Nano ELISA (BMG Labtech, Ortenberg, Alemania).

La validación del ensayo se realizó utilizando muestras de suero pareadas de 15 pacientes de Kosovar con una reacción de polimerasa en cadena (PCR) confirmada para CCHFV y 28 pacientes brasileños con una infección por ZIKV confirmada por PCR, junto con un panel de muestras de suero a priori CCHFV/ZIKV-IgM negativas. Ambos ELISA fueron altamente reproducibles. La sensibilidad y la especificidad fueron comparables con, o incluso superaron, las pruebas estándar de oro y los kits comerciales. Además, las perlas de látex recubiertas con HsFcμR-Igl se agregaron tras la incubación concomitante de un suero IgM positivo y un antígeno marcado con HRP pero no con ninguno de los componentes solos, lo que revela un potencial para el uso de HsFcμR-Igl como una molécula de captura en una rápida agregación basada en pruebas de agregación.

Los autores concluyeron que el HsFcμR-Igl recombinante es una molécula de captura versátil para IC de IgM/antígeno de origen humano y animal y se puede aplicar para el desarrollo de pruebas serológicas basadas en placas y perlas. El estudio fue publicado en la edición de febrero de 2019 de la revista Clinical Chemistry.

Enlace relacionado:
Instituto de Medicina Tropical Bernhard Nocht
Organización Mundial de la Salud
BMG Labtech




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