Desarrollan análisis moleculares para diferenciar especies de Bordetella

La Bordetella parapertussis es el agente causante de la tosferina o pertussis en los humanos y la B. bronchiseptica causa una gran variedad de infecciones respiratorias en los mamíferos, incluyendo los humanos, y un análisis diagnóstico específico podría ser útil para el uso de rutina o en los laboratorios de referencia.

La presencia de B. bronchiseptica puede dar resultados confusos cuando de usan los métodos moleculares actuales con B. pertussis o B. parapertussis y aunque B. bronchiseptica puede ser rara, su prevalencia es desconocida con certeza y puede causar diagnósticos erróneos, en particular en adolescentes y adultos.

Los científicos del Instituto de Tecnología Química (Praga, República Checa) con sus colegas en Francia recolectaron cepas de referencia de B. bronchiseptica, B. parapertussis, B. pertussis y B. petrii, B. holmesii y aislados clínicos de estas especies y muestras de esputo, recogidas de pacientes con un diagnóstico confirmado de infección por B. bronchiseptica por cultivo.

Los aislados clínicos y las cepas de referencia fueron cultivadas a 36°C durante 48 horas (B. bronchiseptica, B. parapertussis y B. petrii) a 72 horas (B. pertussis y B. holmesii) en agar Bordet Gengou que contiene 15% de sangre de oveja desfibrinada. El ADN bacteriano fue aislado con los kits DNeasy de sangre y tejidos (Qiagen GmbH, Hilden, Alemania). También se realizó la tipificación de secuencia multilocus (MLST). Se realizó una reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (PCR) y fue analizada en el LightCycler 480 (Roche Applied Science, Penzberg, Alemania.

El análisis de las secuencias reveló una región que está altamente conservada en los genomas de todos los aislados clínicos de B. bronchiseptica y B. parapertussis. Esta región contiene sitios de regulación, incluyendo un sitio de unión al ribosoma y el sitio de unión a la polimerasa. La región objetivo de varios aislados clínicos de ambas especies fue secuenciada y la alineación de las secuencias permitió el desarrollo de un ensayo de PCR de dos pasos, en tiempo real. La sensibilidad de este análisis de PCR en tiempo real para la detección de B. bronchiseptica/B. parapertussis y B. parapertussis fue de 24 y 22 unidades formadoras de colonias (UFC) por reacción, respectivamente.

Los autores concluyeron que el primera análisis de PCR detectó el ADN de todos los aislados clínicos analizados, tanto de B. bronchiseptica como de B. parapertussis. El segundo ensayo de PCR detectó sólo el ADN de los aislados clínicos de B. parapertussis, lo que permite la discriminación entre B. parapertussis y B. bronchiseptica. El estudio fue publicado el 14 de enero de 2014, en la revista Diagnostic Microbiology and Infectious Disease.


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