Prueba rápida diagnostica la sepsis severa

La mayoría de los pacientes, el 83%, fueron captados en las salas de emergencias. La sangre se recogió en tubos con EDTA en el momento del cultivo inicial de sangre, y fue colocada inmediatamente en hielo. La capa de plasma y la capa de glóbulos blancos fueron separadas y dos alícuotas fueron transferidas a crioviales, con código de barras a -20°C, hasta que fueron trasladados a un congelador a -80ºC.

Se realizó el análisis transcriptómico mediante la secuenciación de alta eficiencia de ADN complementario (ADNc) (secuenciación de ácido ribonucleico, ARN-Seq) y se prepararon bibliotecas de ADNc a partir de ARN total utilizando el kit de preparación de muestras de ARN Total, TruSeq Stranded, con la guía de preparación de muestras, Ribo-Zero (Illumina; San Diego, CA, EUA; www.illumina.com). La secuenciación de ARN se realizó en el instrumento GAIIx de Illumina usando un solo procesamiento de lectura de secuencias de una longitud de 63 pares de bases.

Todos los pacientes en que se sospechaba que estaban infectados en la primera presentación clínica fueron confirmados en 19 de los 37 individuos que fueron finalmente diagnosticados con sepsis. Sin embargo, se observaron niveles similares de significación de la asociación de la firma de tolerancia a la endotoxina con la sepsis para este grupo como un todo, y para ese subconjunto del grupo con infecciones confirmadas. Entre aquellos con sepsis, la Firma de Tolerancia a la Endotoxina estaba significativamente enriquecida en el grupo con cultivos positivos, aunque hubo una tendencia hacia el enriquecimiento en el grupo con cultivos negativos.

La firma completa de 99 genes de Tolerancia a la Endotoxina fue útil para caracterizar la disfunción inmune en la sepsis, pero un menor número de genes sería de más uso, para una prueba de diagnóstico. El equipo seleccionó genes que mostraron una expresión diferencial mayor de 1,5 veces, entre pacientes con sepsis y los controles, e identificaron un conjunto principal de 31 genes de los 99 originales de la Firma de Tolerancia a la Endotoxina. La nueva prueba para la firma genética requiere apenas una hora e identificó el 96% de los pacientes que se encontraban en las primeras etapas de la sepsis.

Robert EW Hancock, PhD, profesor de microbiología y autor principal del estudio, dijo: “Hemos identificado una firma genética que se asocia con el diagnóstico eventual de la sepsis y la falla orgánica posterior. Podemos probar esta firma genética tan pronto como el paciente llega a la sala de urgencias. Con la sepsis, cada hora cuenta, el tratamiento incluye antibióticos agresivos, pero los medicamentos más potentes no pueden ser administrados sino hasta que un diagnóstico sea confirmado por el riesgo de bacterias resistentes a los antibióticos”. El estudio fue publicado el 7 de octubre de 2014, en la revista EbioMedicine.


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University of British Columbia

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