Se valida un análisis LAMP para la leishmaniasis visceral

La leishmaniasis visceral (LV) es una de las enfermedades infecciosas más desatendidas con una incidencia anual de 50.000 a 90.000 casos nuevos en todo el mundo. Los casos de LV se caracterizan por episodios irregulares de fiebre, pérdida de peso, hepatoesplenomegalia, hipergammaglobulinemia, pancitopenia y anemia.

El diagnóstico de la LV se basa en la combinación del examen clínico que involucra un historial de fiebre de más de dos semanas con esplenomegalia y hepatomegalia, junto con pruebas parasitológicas o serológicas positivas. La demostración de amastigotes por microscopía es invasiva, arriesgada y técnicamente exigente con la limitación de ofrecer una baja sensibilidad.

Un equipo de científicos que trabajan en el campus del hospital Safdarjung (Pune, India) incluyó en un estudio a un total de 267 participantes elegibles, que comprendían 179 casos de LV y 88 controles. Los sospechosos de LV que tuvieron fiebre durante más de dos semanas y que provenían del área endémica de LV fueron analizados mediante la prueba de diagnóstico rápido, la prueba de tira rK39 (InBios International, Seattle, WA, EUA) y/o el examen microscópico de Giemsa de los aspirados esplénicos o de médula ósea teñidos para observar la presencia de amastigotes de Leishmania donovani.

El equipo desarrolló un ensayo simplificado de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP, por sus siglas en inglés) basado en lisis sanguínea directa, DBL-LAMP, al que se le verificó su exactitud diagnóstica. También realizaron un ensayo LAMP de tubo cerrado descrito previamente. Al final de la reacción, los tubos se dejaron enfriar a temperatura ambiente y se centrifugaron brevemente para permitir la mezcla de SYBR Green I con el producto amplificado. Los positivos tomaron el color verde de manera instantánea mientras que los negativos se mantuvieron de color naranja.

Los científicos informaron que la sensibilidad y la especificidad del ensayo LAMP fueron de 98,3% y 96,6%, respectivamente. El análisis de la curva ROC no mostró una diferencia significativa entre el área bajo la curva (AUCROC) para el ensayo LAMP y rK39 RDT, lo que demostraba que LAMP es una prueba de diagnóstico excelente. El ensayo DBL-LAMP, realizado en 67 pacientes con LV y 100 muestras de control, produjo una sensibilidad del 93,1% y una especificidad del 100%. El análisis DBL-LAMP para el diagnóstico de LV fue más fácil de realizar y además demostró una reducción en el costo y en el tiempo de respuesta, lo que lo coloca un paso adelante hacia la aplicación de campo. El tiempo total para realizar el ensayo LAMP se redujo a la mitad (1,25 horas) cuando se usó la lisis sanguínea directa en lugar del ADN extraído en columna superando, de esta manera, el requisito de aislamiento del ADN mediante el uso directo de sobrenadante de lisado crudo en lugar del ADN.

Los autores concluyeron que el LAMP de tubo cerrado validado para el diagnóstico de LV proporcionará ímpetu al programa de eliminación de LV en curso en el subcontinente indio. El ensayo basado en la lisis sanguínea directa promueve su alcance para la aplicación en entornos de campo al reducir aún más el tiempo y el costo. El estudio fue publicado el 15 de noviembre de 2018, en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

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Hospital Safdarjung
InBios International