Desarrollan análisis enzimático para medición de fosfolípidos de éter en plasma

El éter fosfolípido de etanolamina (ePE) y el éter fosfolípido de colina (ePC) se encuentran en plasma humano (suero), pero la concentración relativa de los fosfolípidos de éter en los fosfolípidos del suero humano es muy baja en comparación con la concentración en los tejidos y en las células tales como los leucocitos y los eritrocitos.

Las funciones o papeles fisiológicos de los fosfolípidos de éter en el suero (plasma) no están bien dilucidadas; sin embargo, se han reportado disminuciones en los plasmalógenos en el suero (plasma) en varias enfermedades tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, el síndrome metabólico, la esquizofrenia y los pacientes urémicos.

Científicos del Instituto de Funciones Reológicas de los Alimentos, (Fukuoka, Japón) obtuvieron muestras de sangre de 12 voluntarios mayores de 70 años (76,3 ± 5,7). El plasma se separó usando una centrífuga clínica a una velocidad de 1000 g durante 5 minutos. La hemólisis se verificó visualmente y todos los plasmas hemolizados se descartaron. Los lípidos se extrajeron del plasma después del tratamiento con fosfolipasa A1.

La fosfolipasa A1 (PLA1) hidroliza los diacil fosfolípidos en el plasma (suero) y deja intactos el ePE y el ePC. Después de la extracción de lípidos, se hidroliza el ePE usando la fosfolipasa D específica de glicerofosfolípidos (GPL-PLD) a etanolamina, y el ePC es hidrolizado por la GPL-PLD a colina. La reacción de oxidación de la etanolamina es catalizada a través de la amina oxidasa, y la reacción de oxidación de la colina es catalizada por la colina oxidasa. Los últimos pasos son catalizados por la peroxidasa, y Amplex Red reacciona con peróxido de hidrógeno (H2O2) para producir resorufina fluorescente. La intensidad de la fluorescencia se midió usando un lector de microplacas de fluorescencia (serie DTX, Beckman Coulter, Tokio, Japón; www.beckmancoulter.com). Las longitudes de onda de excitación y emisión se establecieron en 535 y 595 nm, respectivamente.

El equipo encontró que la cantidad de ePE en el plasma humano medido por el método enzimático se correlacionó bien con el método de la cromatografía líquida-ionización por electrodispersión-espectrometría de masas en tándem (LC / ESI-MS), pero la correlación de ePC entre los dos métodos fue un poco menos bueno que la encontrada para la ePE. Los autores concluyeron que el método es sensible y de alto rendimiento para el análisis de fosfolípidos de éter en el plasma. El método también se puede realizar usando lectores de microplacas colorimétricos y/o espectrofotómetros. De esta manera, el método enzimático se puede realizar en muchos laboratorios clínicos ordinarios sin necesidad de usar aparatos costosos. Además, el método enzimático puede aplicarse al análisis de fosfolípidos de éter (ePE y ePC) no solo en plasma humano, sino también al ensayo de ePE y ePC en otros tejidos. El estudio fue publicado en marzo de 2018 en la revista Practical Laboratory Medicine.