Método no invasivo captura células tumorales circulantes

Se ha presentado un sistema fluorescente, demostrado clínicamente, de captura de células tumorales circulantes (CTC), para el cáncer colorrectal, guiado por virus, para la realización de pruebas genéticas.

Estos diagnósticos acompañantes, no invasivos, son importantes para la terapia personalizada, dirigida contra el cáncer, porque las estrategias actuales de detección de las CTC dependen principalmente de los marcadores en la superficie de las células epiteliales, y la presencia de poblaciones heterogéneas de CTC con características epiteliales y/o mesenquimales pueden plantear obstáculos para la detección de las CTC.

Científicos de la Universidad de Okayama (Japón) desarrollaron un nuevo método para capturar las CTCs en vivo entre millones de leucocitos de la sangre periférica, utilizando una proteína verde fluorescente (GFP) que expresa el adenovirus atenuado, en el que el promotor de la telomerasa regula la replicación viral. El equipo utilizó diferentes líneas celulares y un adenovirus recombinante.

Se realizó la coloración inmunoquímica en células sembradas en portaobjetos de cámara de cultivo de tejidos. Las células fueron marcadas con anticuerpos primarios de ratón para varios receptores y se analizaron mediante citometría de flujo de células individuales (FACS; Becton Dickinson, Mountain View, CA, EUA). Se extrajo el ADN a partir de modelos de CTC y muestras clínicas y el análisis de la mutación de los genes se realizó por secuenciación directa y la secuencia de cada uno de los genes fue analizada con un Analizador Genético ABI PRISM 3100 (Life Technologies; Carlsbad, CA, EUA).

Las muestras de sangre obtenidas de ocho pacientes con cánceres colorrectales que contenían genes mutados fueron analizadas por el sistema de captura de células tumorales circulantes, basado en el adenovirus OBP-401, de replicación competente y por la reacción en cadena de la polimerasa con bloqueo específico de los alelos (ASB-PCR). En experimentos preliminares, el número de células positivas para la GFP en la puerta P3 fue de menos de 10 células en algunas muestras de sangre clínicas y, por lo tanto, se realizó un análisis de ASB-PCR usando células GFP-positivas en la puerta P2. Entre las ocho muestras de sangre de pacientes con diversas etapas del cáncer colorrectal, se detectaron las mismas mutaciones de genes en las CTC como en los tumores primarios de dos pacientes con cáncer colorrectal avanzado.

Los autores llegaron a la conclusión de que han establecido un sistema de captura de células tumorales circulantes dependiente de la telomerasa para la genotipificación de tipos de CTCs epiteliales, mesenquimales y de transición epiteliales-mesenquimales (EMT), usando la variante competente OBP-401 del adenovirus-replicación específica-telomerasa y análisis de clasificación de las células activado por fluorescencia (FACS). Esta tecnología facilita la vigilancia de las alteraciones genéticas en las CTC viables en los pacientes con cáncer. El estudio fue publicado el 8 de julio de 2014, en la revista Gut.

Enlaces relacionados:

Okayama University

Becton Dickinson

Life Technologies