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06 feb 2023 - 09 feb 2023

Análisis colorimétrico simple determina la concentración de mercaptalbúmina humana

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 07 Jul 2022
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Imagen: Lector de microplacas multimodo VICTOR Nivo (Fotografía cortesía de PerkinElmer)
Imagen: Lector de microplacas multimodo VICTOR Nivo (Fotografía cortesía de PerkinElmer)

La albúmina sérica humana (AlbS) puede tomar dos formas, mercaptalbúmina (HMA) o no mercaptalbúmina (HNA), según el estado redox de su Cys34. La proporción de HMA y HNA se considera como un nuevo biomarcador de estrés oxidativo.

La mayoría de los estudios sobre el estado redox de AlbS utilizan cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Varios estudios recientes también han empleado espectrometría de masas, que produce una resolución más alta, lo que permite distinciones más finas entre estructuras moleculares. Un puñado de estudios han explorado enfoques alternativos utilizando análisis simples basados ​​en colorantes.

Los laboratorios clínicos del Hospital de la Universidad de Tokio (Tokio, Japón), colaboraron con colegas de Nitto Boseki Co. Ltd., (Kawasaki, Japón), midiendo las concentraciones de HMA en muestras de suero de 36 pacientes sanos según los cambios de absorción del Hydrol de Michler. El Hydrol de Michler (4,4′-Bis(dimetilamino)benzhidrol) es un colorante azul con una absorción máxima a 612 nm, y su absorción disminuye cuando reacciona con un grupo tiol.

Después de procesar las muestras, la solución se incubó adicionalmente a temperatura ambiente durante 20 minutos y se midió la absorbancia a 612 nm (A612) con un lector de microplacas Nivo 3F de placa de 96 pozos (PerkinElmer, Waltham, MA, EUA). Para evaluar el desempeño de los ensayos, se determinó la correlación mediante una regresión lineal entre las concentraciones de HMA obtenidas mediante el ensayo Hydrol de Michler y las concentraciones de referencia correspondientes obtenidas mediante HPLC y ensayos de púrpura de bromocresol (BCP).

Los científicos informaron que las concentraciones de HMA obtenidas por el ensayo Hydrol de Michler estaban altamente correlacionadas (r2 = 0,97) con los valores de referencia obtenidos por HPLC (% de HMA) y el ensayo BCP (albúmina total). El % de HNA, obtenido por los ensayos Hydrol de Michler y BCP combinados, también dio una buena correlación (r2 = 0,96) y una pequeña desviación (promedio 2,4%) con respecto a la HPLC como método de referencia. El uso del cociente HMA/HNA, que es función de la oxidación de Cys34, es considerado como un biomarcador potencial para evaluar la gravedad de las enfermedades crónicas en las que el estrés oxidativo es una manifestación etiológica importante.

Los autores concluyeron que se pueden medir las concentraciones de HMA en el suero humano mediante el ensayo Hydrol de Michler, que se basa en una aproximación de las concentraciones de HMA con los cambios colorimétricos de Hydrol de Michler debidos principalmente a los tioles. La exactitud del ensayo mejoró significativamente mediante la incubación previa de un subconjunto de las muestras con un agente alquilante (yodoacetamida) y restando su absorción de la absorción de las muestras correspondientes sin alquilación. También se obtuvieron proporciones de HMA y HNA combinando el ensayo Hydrol de Michler y el ensayo BCP (para la concentración de albúmina total). Los resultados se correlacionaron bien con la HPLC, que se ha establecido como un método estándar para la medición de HMA/HNA. El estudio se publicó el 8 de junio de 2022 en la revista Practical Laboratory Medicine.


Enlaces relacionados:
Hospital de la Universidad de Tokio
Nitto Boseki Co. Ltd.
PerkinElmer

 

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