Se desarrolla un análisis RPA de flujo lateral para el Cryptococcus en el LCR

Las presentaciones más comunes de la criptococosis son la meningitis y la meningoencefalitis. La meningitis criptocócica (MC) es una meningoencefalitis subaguda y la causa más común de meningitis en adultos con tasas de mortalidad muy altas, así como pérdida de visión y de audición en los sobrevivientes.

El diagnóstico precoz y el tratamiento de la criptococosis reducen la mortalidad. Se debe realizar una punción lumbar, también conocida como punción espinal y el análisis del líquido cefalorraquídeo (LCR) en los pacientes con sospecha de MC. Los métodos tradicionales para detectar Cryptococcus spp. tales como la coloración de tinta china y el cultivo no son ideales. Aunque es lo suficientemente sensible y específico, la detección del polisacárido del antígeno criptocócico tiene un efecto de gancho de dosis alta.

Los científicos del Hospital de la Universidad de Medicina del Sur de Shenzhen (Shenzhen, China) y sus colegas, desarrollaron y construyeron tiras de flujo lateral combinadas con el ensayo de amplificación de polimerasa de recombinasa (LF-RPA) para detectar las secuencias de ADN específicas de C. neoformans y C. gattii. El límite de detección se evaluó utilizando diluciones en serie del ADN genómico de C. neoformans y de C. gattii. La especificidad fue evaluada por una cantidad excesiva del ADN genómico de otros patógenos. También se analizaron el tiempo óptimo de detección y la temperatura de amplificación. Los parámetros de diagnóstico se calcularon primero utilizando 114 muestras clínicas y luego se compararon con los de otros métodos de diagnóstico.

Los resultados del ensayo LF-RPA y el “ensayo de flujo lateral de CrAg” se compararon con los del cultivo y/o la coloración con tinta china. La coloración con tinta china y el “ensayo de flujo lateral de CrAg” se realizaron con el “kit de coloración de Cryptococcus neoformans” (Baso Diagnostics, Inc., Zhuhai, China) y el “kit de Análisis de Flujo Lateral para el Antígeno Criptocócico” (IMMY, Inc., Norman, OK, EUA), respectivamente.

El equipo informó que el ensayo LF-RPA pudo detectar 0,64 pg de ADN genómico de C. neoformans por reacción al cabo de 10 minutos y fue altamente específico para Cryptococcus spp. El sistema podría funcionar bien en un amplio rango de temperatura de 25 a 45°C. La sensibilidad y especificidad general fueron del 95,2% y del 95,8%, respectivamente. Como plantilla de amplificación para el ensayo de LF-RPA, tanto los lisados celulares como el ADN genómico producen resultados experimentales similares. El límite de detección del ensayo LF-RPA es ligeramente más alto que el del “Ensayo de Flujo Lateral de CrAg”.

Los autores concluyeron que su sistema LF-RPA demostró ser un método sensible y específico para la detección visible, rápida y precisa de Cryptococcus spp. en el líquido cefalorraquídeo y podría ser útil para el cribado preliminar clínico de la meningitis criptocócica. El estudio se publicó el 25 de enero de 2019 en la revista BMC Infectious Diseases.

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Universidad de Medicina del Sur de Shenzhen
Baso Diagnostics, Inc
IMMY, Inc