Técnicas para diagnóstico de la anemia hemolítica autoinmune

Se evaluó el uso de las técnicas de las pruebas en gel (PG) y de citometría de flujo (CF) para la detección de inmunoglobulina G (IgG) unida a los eritrocitos.

Las dos pruebas son importantes en el diagnóstico de la anemia hemolítica autoinmune (AIHA) en casos negativos por la técnica convencional de tubo (TCT) o la prueba de Coombs directa (DAT).

Hematólogos en la Universidad Ain Shams (El Cairo, Egipto) realizaron un estudio de casos-control, entre agosto de 2008 y octubre de 2010. El estudio incluyó a 50 pacientes, que fueron diagnosticados clínicamente de tener anticuerpos calientes AIHA con pruebas negativas TCT-DAT. Cincuenta y cinco voluntarios sanos con TCT-DAT negativos, poliespecíficos, fueron incluidos también, como individuos control.

Las muestras de sangre fueron analizadas usando la prueba de Coombs Directa por TCT y GT y usando la CF. En el ensayo con CF, los resultados se expresaron como porcentaje de fluorescencia, que es el porcentaje de eritrocitos que expresan los niveles de IgG anti-humana superiores a los del control de isotipo, y la intensidad media de fluorescencia (IMF). Para la prueba de GT, una prueba positiva es donde las células aglutinadas forman una línea roja en la superficie del gel, o aglutinados dispersos en el gel y fueron calificadas de G1-G4. Para las TCT, la aglutinación fue detectada macroscópicamente y confirmada con examen microscópico.

Los resultados del estudio mostraron que 46 de 50 (92%) pacientes fueron positivos por GT. La curva ROC (Característica Operativa del Receptor) para el ensayo de CF determinó que un punto de corte del 17,5% de fluorescencia era el mejor valor para la interpretación de la CF-DAT positivamente en el grupo de pacientes con anemia hemolítica, con un 100% de sensibilidad y especificidad. El mejor punto de corte para la IMF fue de 1.74, con un 76% de especificidad y 96% de sensibilidad. Tanto el porcentaje medio de fluorescencia y la IMF fueron significativamente mayores entre los pacientes, en comparación con los controles. El ensayo de CF se realizó usando el citómetro de flujo, Coulter Epics XL, de 3 colores (Beckman Coulter Inc., Brea, California, EUA).

Los autores concluyeron que la GT y la CF son instrumentos sensibles para evaluar la TCT-DAT- AIHA, negativa. Sin embargo, la CF es más precisa y, por lo tanto, debe ser utilizada cuando una fuerte sospecha clínica de AHAI se asocia con resultados disonantes TCT y de GT. Ellos proponen que se deben emplear valores de corte de porcentaje de fluorescencia en la CF para determinar los casos AIHA negativos de Coombs. Sin embargo, comentan que se necesitan más estudios para definir el mejor valor de corte para la positividad de la CF IgG DAT en estos casos. El estudio fue publicado en la edición de junio de 2012 en la revista International Journal of Laboratory Hematology.

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Ain Shams University