Inmunoanálisis detecta anticuerpos de diferentes grupos del virus del dengue

Las infecciones por el virus del dengue (DENV) son diagnosticadas preferencialmente mediante la detección de anticuerpos específicos de inmunoglobulina M (IgM), análisis del antígeno no estructural del DENV de la proteína-1 (NS1) o por amplificación del ácido ribonucleico viral en muestras de suero de los pacientes.

Dado que la mayoría de los anticuerpos contra los cuatro virus del dengue presentan reacción cruzada, un análisis ELISA de tipo específico para las muestras de suero, sería beneficioso para estudiar la respuesta inmune a los virus circulantes en pacientes, y también en los individuos sanos en los condados endémicos.

Los científicos del Instituto Bernhard Nocht de Medicina Tropical (Hamburgo, Alemania) recolectaron muestras de sangre durante un período de diez años, incluyendo 64 turistas europeos con fiebre del dengue aguda, cuyo rango de edad fue de 20 a 55 años, y con una relación de hombre-mujer de 1:2. Para probar la especificidad del ELISA de unión de complejos inmunes (ICB) del DENV, se incluyeron las muestras de suero de 88 individuos que se estaban realizando diagnósticos de rutina.

Cuando las muestras de suero y el dominio III recombinante de la envoltura, marcado con enzima III (EDIII) fueron incubados juntos, se forman complejos inmunes (CI) de los antígenos, que se unen de forma simultánea a una fase sólida recubierta con un fragmento del receptor de la región cristalizable (Fc) (CD32). Después de un único procedimiento de lavado, se pueden determinar los CI marcados, unidos. Para mejorar aún más las reacciones de tipo específico se añadieron concentraciones altas de las proteínas ED III no marcadas, heterólogas, a los antígenos marcados.

Las muestras de suero de 64 pacientes, con infecciones confirmadas por DENV-1-2-3 o-4, fueron analizadas usando la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) contra cuatro antígenos DENV EDIII recombinantes marcados con enzimas. Los ensayos de RT-PCR fueron realizados en un Sistema LightCycler 480 (Roche; Mannheim, Alemania). Se encontraron los anticuerpos frente a los antígenos EDIII en 55 pacientes dando una sensibilidad del 86%. Se encontró una total concordancia entre el serotipo detectado por PCR en las primeras muestras y el anticuerpo específico de serotipo en las muestras posteriores. Los anticuerpos anti-EDIII específicos de tipo fueron detectados inicialmente de 9 a 20 días después del inicio de la enfermedad. En el 21%de las muestras recogidas de personas en Vietnam, se pudieron identificar las infecciones secundarias con anticuerpos contra dos serotipos.

Los autores concluyen que los datos obtenidos con el ICB-ELISA muestran que después de la infección primaria por el DENV, los anticuerpos específicos del tipo correspondiente fueron detectados en casi todas las muestras recogidas al menos dos semanas después de la aparición de la enfermedad. El método será de gran valor para determinar la distribución de los diversos anticuerpos anti-DENV específicos de tipo en las zonas endémicas de DENV. La fiebre del dengue es una enfermedad viral, muy prevalente, transmitida por artrópodos, con 2.500 millones de personas en zonas tropicales o subtropicales en riesgo de infección. El cuadro clínico del dengue puede variar considerablemente de una mera fiebre al síndrome de shock grave. El número anual de infecciones se estima en varios cientos de millones.

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Bernhard Nocht Institute for Tropical Medicine
Roche