Técnica molecular sensible para detectar virus respiratorios

El diagnóstico de virus respiratorios, basado actualmente en el aislamiento de los virus, la detección de antígenos o la serología—todos los cuales requieren demasiado tiempo y, en algunos casos tienen una sensibilidad baja.

Se utilizó un método de detección de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa, en tiempo real (RT-PCR) para determinar la frecuencia de una amplia gama de virus respiratorios en los especímenes de pacientes ambulatorios de todas las edades que mostraban síntomas de infección respiratoria aguda (IRA).

Los virólogos de la Universidade Federal do Espírito Santo (Vitória, Brasil) recolectaron aspirados nasofaríngeos (NPAs) de 162 pacientes, de todas las edades, que fueron atendidos en cualquiera de las salas de emergencia o unidades de atención primaria, entre agosto de 2007 y agosto de 2009 Todas las muestras fueron analizadas mediante el ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y el análisis de RT-PCR en tiempo real, múltiplex, Fast-Track Diagnostics Respiratory Pathogens 21 PLUS (FTDRP). Veintitrés patógenos respiratorios, incluyendo 18 virus respiratorios humanos y 5 especies bacterianas, fueron analizadas utilizando el protocolo de multiplexación.

En todas las muestras se buscaron siete virus respiratorios, el virus sincitial respiratorio (VRS), los virus de parainfluenza 1-3 (PIV 1-3), los virus de la influenza A y B (Inf A, Inf B) y el adenovirus humano (HAdV), mediante IFI utilizando el Panel Respiratorio 1 y el kit de detección primaria Viral e identificación (Chemicon Internacional, Millipore, Billerica, MA, EUA). La PCR multiplex, en tiempo real, RT-PCR se realizó utilizando el instrumento FTDRP 21 plus (Fast-Track Diagnostics; Sliema, Malta). La amplificación se realizó en el sistema de PCR en tiempo real con el termociclador ABI 7500 (Applied Biosystems; Foster City, CA, EUA).

El método de IFI detectó 33 muestras positivas (20,4%) con el virus de la influenza, el agente etiológico más común detectado (23/33). Los virus Inf A y B Inf correspondieron a 8% (13/162) y 6,2% (10/162) de las muestras, respectivamente, y la técnica IFI detectó sólo las infecciones individuales. Los investigadores informaron que 88 (54,3%) de los especímenes dieron resultados positivos para uno o más virus respiratorios usando la técnica de RT-PCR múltiplex en tiempo real. El virus de la influenza (15,4%), el rinovirus humano (HRV) (8%) y el virus sincitial respiratorio (7,4%) fueron los virus que se detectaron con más frecuencia y representaron alrededor de un tercio de las muestras positivas. Se observaron seis casos de co-detección viral, que involucraron principalmente al virus sincitial respiratorio. Se detectaron los siguientes bacterias: Streptococcus pneumoniae en 43 muestras, Staphylococcus aureus en 20, y 2 con Haemophilus influenza.

Los autores concluyeron que el uso de RT-PCR multiplex, en tiempo real, aumentó la detección viral en un 33,9% y demostró un mayor número de virus respiratorios implicados en los casos de IRA, incluyendo los virus respiratorios más recientemente descritos como el bocavirus humano, el metaneumovirus humano, el virus de la influenza A (H1N1) pdm09, el coronavirus humano NL63 (HCoV) y HCoV HKU1. El estudio fue publicado en la edición de septiembre 2014 de la revista Memorias del Instituto Oswaldo Cruz.

Enlaces relacionados:

Universidade Federal do Espírito Santo

Chemicon International

Fast-track Diagnostics

Applied Biosystems