Desarrollan prueba de orina para enfermedad de Chagas congénita

Se ha desarrollado una prueba de nanopartículas en orina para el Chagas (Chunap), con el fin de concentrar, conservar y detectar antígenos de Trypanosoma cruzi en la orina para el diagnóstico precoz, no invasivo de la enfermedad de Chagas congénita

El diagnóstico convencional de la enfermedad de Chagas congénita se basa en la microscopía, en el nacimiento y la serología a los nueve meses; sin embargo, la microscopía pasa por alto muchas infecciones y muchos lactantes en situación de riesgo no logran completar la serología entre los seis y los nueve meses.

Un equipo de científicos internacionales encabezados por los de la Universidad Johns Hopkins (Baltimore, MD, EUA) recolectó 74 muestras de orina de lactantes bolivianos sin infección congénita y 23 muestras de lactantes con infección congénita cuya recolección de la orina se produjo antes de la iniciación de tratamiento contra los tripanosomas. Las muestras de orina de 12 niños seronegativos de Lima (Perú) fueron recogidas como controles negativos no endémicos. Las muestras de sangre de los recién nacidos obtenidas al momento de nacer y al cabo de un mes fueron evaluadas por el micrométodo, utilizando un microscopio y con la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

Las muestras para el cribado fueron analizadas por dos pruebas rápidas de diagnóstico (PDR): una prueba de hemaglutinación indirecta (HAI) y la prueba Chagas Detect, un ensayo de tira inmunocromatográfica (InBios International; Seattle, WA, EUA). El equipo evaluó la capacidad de las nanopartículas de poli-N-isopropilacrilamida funcionalizadas con Tripán azul y sintetizadas por polimerización con precipitación y caracterizadas con la espectroscopia de correlación de fotones, para capturar, concentrar y preservar antígenos de T. cruzi.

Las muestras de orina de niños infectados congénitamente y de niños no infectados fueron concentradas usando estas nanopartículas. Los antígenos fueron eluídos y detectados mediante las pruebas de transferencia de Western usando un anticuerpo monoclonal contra el lipofosfoglicano de T. cruzi. La visualización de las bandas antigénicas fue realizada utilizando un sistema de quimioluminiscencia realzada (Supersignal West Dura, Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL, EUA). La prueba Chunap fue realizada por un biólogo de laboratorio que no conocía el estado de Chagas de los pacientes.

Las nanopartículas pudieron concentrar los antígenos de T. cruzi 100 veces, con lo cual, el límite de detección de la prueba de transferencia de Western disminuyó de 50 ng/mL a 0,5 ng/mL. La sensibilidad de la prueba Chunap con una sola muestra al mes de nacido fue de 91,3% (21/23) un valor comparable a la PCR en dos muestras al nacer y al mes, y significativamente más alta que la microscopía realizada en dos muestras. La especificidad de Chunap fue del 96,5%, 71/74 para las muestras endémicas, 12/12 para los especímenes no endémicos. La sensibilidad acumulativa del micrométodo y la PCR fue del 34,8% (8/23) y 91,3% (21/23), respectivamente. Los antígenos de T. cruzi secuestrados por las partículas estaban protegidos de la digestión con tripsina.

Los autores concluyeron que Chunap tiene el potencial de permitir el diagnóstico precoz en los puntos de atención de la enfermedad de Chagas congénita en los centros de salud periféricos. Será necesario aplicar otras medidas para poder aplicar esta nanotecnología en los países en desarrollo. El equipo está optimizando actualmente un método de separación novedoso basado en el etiquetado magnético de las nanopartículas de captura para permitir la separación de las partículas de la orina sin necesidad de una centrífuga de alta velocidad. Aunque este método se utilizó en este estudio para la enfermedad de Chagas, también se podría adaptar para la detección de otras infecciones parasitarias en la orina y otros fluidos corporales. El estudio fue publicado el 2 de octubre de 2014 en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.


Enlaces relacionados:

Johns Hopkins University

InBios International

Thermo Fisher Scientific