Método detecta parásitos de la malaria mediante irradiación con microondas

Se ha descrito una plataforma prometedora que incluye un procedimiento de extracción de ácidos nucleicos, rápido y confiable, a partir de sangre humana, que permite la detección de los parásitos de la malaria, utilizando irradiación con microondas.

Aunque la microscopía realizada en los frotis de sangre todavía se considera el estándar de oro para el diagnóstico de las infecciones de malaria, la microscopía es frecuentemente incapaz de detectar infecciones de baja densidad y requiere una gran experiencia.

Científicos de la Universidad de Tübingen (Alemania), quienes trabajaron con sus colegas en la República del Congo recolectaron muestras de sangre venosa, en tubos heparinizados de 5 mL o mediante punción digital y almacenando la sangre en papel estéril de filtro, Whatman, al momento de la admisión en el Hospital Albert Schweitzer (Lambaréné, Gabón), de los pacientes que sufrían de infecciones graves por Plasmodium falciparum.

Se extrajo el ADN de muestras de sangre total, así como de parásitos cultivados de la serie de dilución utilizando el procedimiento de extracción convencional con el mini kit para sangre QIAamp DNA (Qiagen; Hilden, Alemania). Se usó una metodología de amplificación isotérmica mediado por bucle, a la medida (LAMP), que utilizó el azul de hidroxinaftol (HNB) y polimerasas de ADN de Bacillus stearothermophilus (Bst 2.0) para la detección molecular de parásitos de la malaria. Las reacciones de análisis LAMP fueron realizadas utilizando dos bloques de calor (Bloque Termostato BT 200, Kleinfeld Labortechnik, Gehrden, Alemania) y precalentamiento a 60°C para la amplificación de ADN durante 45 minutos, y la inactivación enzimática durante dos minutos a 80°C.

Después de la irradiación con microondas para el aislamiento del ADN, los ensayos de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) convencionales fueron capaces de detectar hasta cinco parásitos de la malaria/µL. La metodología LAMP fue capaz de detectar una cantidad, tan baja, como un parásito de P. falciparum/µL después de la extracción de ADN por irradiación con microondas. Se logró un tiempo de respuesta de 45 minutos desde la extracción del ácido nucleico hasta la lectura visual final. El amplicón fue visualizado a través de un cambio de color definido y posteriormente confirmado por electroforesis en gel. Un cambio de color violeta a la luz azul cielo se consideró un resultado positivo de la amplificación. Si la reacción se mantuvo violeta, la muestra fue evaluada como negativa.

Los autores concluyeron que el procedimiento LAMP ofrece un método barato, sencillo y rápido de detección molecular de parásitos de la malaria. Esta prueba se puede realizar fácilmente en los laboratorios básicos. La metodología ha sido validada como una prueba de concepto y ha sido desarrollada específicamente para su uso en entornos de bajos recursos. Tales pruebas de diagnóstico molecular rápidas pueden ayudarles a los proveedores de salud a realizar intervenciones terapéuticas oportunas en regiones endémicas de malaria. El estudio fue publicado el 24 de noviembre de 2014, en la revista Malaria Journal.


Enlaces relacionados:

University of Tübingen

Albert Schweitzer Hospital

Qiagen

Kleinfeld Labortechnik