Comparan métodos moleculares para detección cuantitativa del virus de Epstein-Barr

La detección cuantitativa del virus de Epstein-Barr, por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real, se ha convertido en el estándar de cuidado en el tratamiento de pacientes inmunocomprometidos y es integral para su tratamiento.

 

Se compararon las características de desempeño de cuatro ensayos en tiempo real, tres que utilizan diferentes reactivos, específico de analito (ASR), y uno que utiliza reactivos desarrollados por el laboratorio, entre sí, para la detección del virus de Epstein-Barr (VEB) en sangre total.

 

Los científicos del Hospital de Investigación Infantil St. Jude (Memphis, TN, EUA)  le agregaron VEB a unas muestras de sangre total, las cuales fueron utilizados para determinar la linealidad cuantitativa, rango de medición analítica, límite inferior de detección, y el coeficiente de variación (CV) para cada ensayo. Las pruebas retrospectivas de 198 muestras clínicas fueron realizadas en paralelo con todos los métodos; se compararon los resultados con el fin de determinar el desempeño cuantitativo y cualitativo, relativos.

 

Los ASRs utilizados en el estudio fueron producidos por Focus Diagnostics (Cypress, CA, EUA), Luminex Corporation (Austin, TX, EUA) y ELITechGroup (Bothell, WA, EUA). La prueba modificada de diagnóstico de laboratorio (LDT) fue utilizada con el sistema QX100 ddPCR (Bio-Rad, Hércules, CA, EUA) para la amplificación por gotitas digitales (ddPCR).

 

Los investigadores encontraron que todos los ensayos mostraron un desempeño similar, sin encontrar alguna diferencia significativa en límite de detección (3.12-3.49 log10 copias/mL). Se observó una correlación cualitativa fuerte con todos los ensayos que utilizaron muestras clínicas con tasas de detección positivas de 89,5% a 95,8%. La correlación cuantitativa de las muestras a través de ensayos clínicos también se observó en el análisis de regresión por parejas. La normalización de resultados de las muestras clínicas a IU/mL no alteró la correlación cuantitativa entre los ensayos.

 

El equipo señala que los reactivos Focus ASR se pueden almacenar a 4°C después de la primera vez que se descongelan, ahorrando tiempo de preparación para exámenes futuros. Este ensayo se realiza en un disco de 96 pozos en un volumen pequeño, y la PCR se puede realizar en menos de una hora, utilizando el 3M Integrated Cycler. Sin embargo, se necesita una gran atención al cargar el disco. Los otros tres métodos utilizan placas de 96 pozos, y las PCR se procesaron en un sistema de detección de secuencias, Applied Biosystems 7500, pero se podrían procesar en otros sistemas que acepten placas de 96 pozos.

 

Los autores concluyeron que la detección cuantitativa del VEB por PCR en tiempo real se puede realizar en un amplio intervalo dinámico lineal, utilizando tres diferentes reactivos comercialmente disponibles y con métodos desarrollados por el laboratorio. El VEB fue detectado con una sensibilidad y una correlación cuantitativa, comparables, para todos los ensayos. El estudio fue publicado en línea el 22 de mayo de 2016, en la revista Journal of Molecular Diagnostics.

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