Validan análisis molecular para brote del dengue

El virus del dengue (DENV) es un miembro del género viral Flavivirus (familia Flaviviridae) que se transmite por mosquitos, causando brotes endémicos y epidémicos en zonas tropicales y subtropicales.

 

El diagnóstico exacto, rápido y precoz de las infecciones por DENV es importante para la salud pública y la atención clínica óptima; Sin embargo, el método estándar de oro de aislamiento dependiente del cultivo celular del DENV, durante la fase aguda de la infección, requiere de mucho tiempo y es engorroso.

 

Los científicos médicos en la Universidad Nacional Cheng Kung (Tainan, Taiwán), recolectaron muestras de suero de pacientes con sospecha de infección por DENV entre julio y noviembre de 2015. Los sueros de los pacientes con infección sospechada por DENV, fueron examinados utilizando la prueba inmunocromatográfica, de un solo paso, SD BIOLINE DuoDengue Dengue NS1 Ag + Ab Combo (Standard Diagnostics, Yongin, Corea). Esta prueba rápida contiene dos dispositivos de análisis, que puede detectar simultáneamente los niveles del antígeno de la proteína no estructural 1 (NS1) y la inmunoglobulina M (IgM) e IgG, en una muestra, respectivamente, en un plazo de 15 minutos.

 

El ácido ribonucleico (ARN) viral se extrajo de muestras de suero y una muestra de control de extracción usando un mini kit QAIamp viral RNA (Qiagen, Venlo, Holanda) o el sistema de extracción automatizado, LabTurbo Virus mini kit, en el Sistema Compacto LabTurbo 48 (Taigen Bioscience Corp., Taipéi, Taiwán). Se realizó el análisis de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR), de las cargas virales, con el kit EC LightMix para el virus del dengue (QRT-PCR; TIB Molbiol, Berlín, Alemania), que es capaz de identificar los cuatro serotipos del dengue.

 

La detección del antígeno NS1, la detección de IgM e IgG, y los ensayos LightMix, se practicaron en un total de 8.989, 8.954, y 1.581 muestras, respectivamente. El ensayo LightMix produjo una curva lineal para cargas virales (VL) entre 102 y 106 copias/reacción y los límites de detección mínimos para los DENV serotipo 1 (DENV1) y DENV2, DENV3, y DENV4 fueron 1, 10, y 100 unidades formadoras de focos (FFU)/mL, respectivamente. Se presentó un 88,9% de concordancia entre los resultados obtenidos utilizando el kit de NS1 combo antígeno y el análisis LightMix y la sensibilidad diagnóstica y la especificidad de los dos métodos fueron 89,4% y 100%, y 84.7% y 100%, respectivamente.

 

Los autores concluyeron que el ensayo LightMix fue eficaz para el diagnóstico precoz de la infección por el DENV. Los datos indicaron que una alta carga viral durante la infección primaria en pacientes de edad avanzada, pueden ser un factor predictivo positivo, para una enfermedad grave, y pueden contribuir a las altas tasas de mortalidad. El estudio fue publicado el 12 de octubre de 2016, en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

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