Desarrollan análisis moleculares para detectar mutaciones genéticas

Se han desarrollado varios análisis para detectar mutaciones genéticas usando coamplificación con una tecnología que usa temperaturas de desnaturalización más bajas para la reacción en cadena de la polimerasa.

La tecnología se ha centrado en el gen del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) ya que las mutaciones del EGFR se encuentran en varios cánceres, incluyendo cáncer de pulmón y cáncer colorrectal. El aumento de la sensibilidad analítica de COLD-PCR permitirá a los clínicos usar cantidades más pequeñas de la muestra para su análisis genético y métodos menos invasivos para la toma de muestras, tales como una extracción de sangre para la preparación de suero o plasma, una recolección de orina, un aspirado con aguja fina o lavado bronquial para análisis genéticos.

COLD-PCR fue desarrollado por Transgenomic Inc. (Omaha, NE, EUA) que llevó a cabo un estudio sobre la capacidad del análisis COLD-PCR para la detección de mutaciones de EGFR en los exones 19-21. Los resultados del estudio indican que los ensayos COLD-PCR detectan todas las supresiones en el exón 19, la mutación T790M en el exón 20 y todas las mutaciones en el exón 21, en las regiones específicas amplificadas, incluyendo L858R y mutaciones puntuales en L861Q. La sensibilidad de detección, confirmada mediante secuenciación de Sanger, fue de 0,05% a 0,2%, usando diluciones de plásmido y de ADN de línea celular. Los experimentos de Límite de Detección han indicado que el ADN mutante puede ser detectado en una muestra de plasma/suero, cuando apenas están presentes cinco a 10 copias de ADN mutante.

Este método para las pruebas genéticas amplifica selectivamente el ADN mutante, reconociendo que el ADN mutante se desnaturaliza a temperaturas más bajas, en una reacción de PCR, en comparación con el ADN normal y libre de mutaciones. Las mejoras específicas de la metodología COLD-PCR permiten la detección de todas las mutaciones presentes en la región amplificada. Por lo tanto, el conocimiento previo de las mutaciones específicas no es necesario. Mediante esta técnica patentada, COLD-PCR amplifica el ADN mutante con un mínimo de amplificación del ADN normal.

El Sr. Craig Tuttle, MS, MBA, director ejecutivo de Transgenomic, comentó: "Una de nuestras principales iniciativas estratégicas es el desarrollo de análisis de sensibilidad muy alta para la detección de mutaciones de bajo nivel en el ADN en los fluidos corporales. Creemos que COLD-PCR nos proporciona la sensibilidad analítica y exactitud para lograr este objetivo”.

El estudio se llevó a cabo en colaboración con el Instituto de Cáncer Dana-Farber (Boston, MA, EUA).

Enlaces relacionados:

Transgenomic Inc
Dana-Farber Cancer Institute