PCR digital para cuantificación de mutaciones marcadoras de la leucemia

Se desarrolló un método general llamado reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con dilución limitante para la cuantificación de los objetivos de la PCR. Este método se utilizó posteriormente para la cuantificación de mutaciones marcadoras de la leucemia aguda.

Mediante la dilución de muestras de ADN de modo que sólo estuvieran presentes una o dos copias por pozo y amplificando luego esas copias con PCR, los científicos fueron capaces de detectar dos copias de ADN leucémico contra un fondo de 160.000 genomas normales.

Posteriormente, el equipo informó que la respuesta clínica de la leucemia aguda se puede predecir con la medición de la respuesta al tratamiento mediante PCR con dilución limitante para cuantificar las células leucémicas con una sensibilidad alta. El Prof. Alec Morley y su laboratorio en la Universidad y Centro Médico de Flinders en Adelaide (SA, Australia) utilizaron entonces PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) para desarrollar un método altamente sensible para el aislamiento y la cuantificación de la traslocación cromosómica que se asocia normalmente con la leucemia mielógena (o mieloide) crónica (LMC), también conocida como leucemia granulocítica crónica (LGC), un cáncer de los glóbulos blancos sanguíneos. Es una forma de leucemia caracterizada por un aumento exagerado en el crecimiento de células, predominantemente mieloides, en la médula ósea y la acumulación de estas células en la sangre.

Debido a que el punto de traslocación para cada paciente es diferente en la LMC, las condiciones de la PCR en tiempo real pueden variar de un paciente a otro y por lo tanto pueden producir resultados diferentes. Por lo tanto, las condiciones de la PCR en tiempo real pueden variar de un paciente a otro y por lo tanto pueden producir resultados diferentes. El laboratorio ha vuelto ahora a la PCR digital.

Monoquant, una empresa asociada a la Universidad de Flinders, utilizó el sistema QX100 de Bio-Rad (Hércules, CA, EUA) para refinar el nuevo análisis clínico para la LMC. El instrumento no sólo ofrece alta sensibilidad sino que también elimina la variabilidad en la eficiencia de la amplificación que resulta de usar cebadores de PCR específicos del paciente, un tradicional punto de estancamiento para la Administración de Alimentos y Medicamentos de los EUA (FDA, Silver Spring, MD, EUA). Monoquant espera que los resultados del sistema QX100 aceleren el proceso de aprobación, de la FDA, para su prueba.

Enlaces relacionados:

Flinders University and Medical Center in Adelaide, South Australia
Monoquant
Bio-Rad
US Food and Drug Administration