Ensayo de genotipificación para enfermedad de Chagas

La enfermedad de Chagas sigue siendo un importante problema de salud pública que infecta entre seis y siete millones de personas en todo el mundo. Los factores que influyen sobre la heterogeneidad clínica de la enfermedad de Chagas no han sido aclarados, aunque se ha sugerido que diferentes resultados clínicos pueden estar asociados con la diversidad genética de los aislados de Trypanosoma cruzi.

 

También se han reportado diferencias en la respuesta terapéutica de los genotipos y definidos de T. cruzi. Ya se han desarrollado estrategias de tipificación para el diagnóstico genotípico específico de la enfermedad de Chagas, con el fin de identificar las unidades de tipificación discreta de T. cruzi (DTU), incluyendo métodos bioquímicos y moleculares; sin embargo, las técnicas tienen limitaciones.

 

Científicos de la Universidad Federal de Ouro Preto utilizaron cepas estándar de T. cruzi, representativas de los tres principales genotipos involucrados en el ciclo doméstico de la enfermedad de Chagas en Brasil, para establecer la metodología TcI/TcVI/TcII Chagas-Flujo ATE-IgG2a, para el serodiagnóstico de la infección por T. cruzi. El equipo mantuvo las cepas en ratones y la infección fue confirmada en todos los ratones infectados con T. cruzi, por positividad de un examen de sangre fresca, realizado al día 7, 10 o 15, después de la infección. Las muestras de suero que fueron utilizadas para la serología, con la metodología, TcI/TcVI/TcII Chagas-Flujo ATE-IgG2a, fueron preparadas a partir de muestras de sangre total recogidas por punción del plexo ocular.

 

Se obtuvieron las formas amastigote/tripomastigote/epimastigote, de los genotipos TcI, TcVI y TcII, de T. cruzi, y se realizó el serodiagnóstico TcI/TcVI/TcII Chagas-Flujo ATE-IgG2a. Los datos de citometría de flujo se obtuvieron con un citómetro de flujo FACSCanto (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, EUA). Después de la selección de los antígenos objetivo, se utilizaron histogramas unidimensionales para cuantificar la reactividad del antígeno específico del genotipo anti-T. Cruzi IgG2a, basado en el límite de positividad establecido utilizando como referencia el control interno. Los resultados fueron expresados como porcentaje de parásitos fluorescentes positivos (PPFP), para cada dilución de la muestra ensayada.

 

Los datos adquiridos demostraron que “α-TcII-TRYPO/1:500, punto de corte/PPFP = 20%”, presentó un excelente desempeño para el diagnóstico universal de la infección por T. cruzi. El conjunto combinado de los atributos “α-TcI-TRYPO/1:4.000, punto de corte/PPFP = 50%”, “α-TcII-AMA/1:1000, punto de corte/PPFP = 40%” y “α-TcVI-EPI/1:1000, punto de corte/PPFP = 45%”, mostraban un buen comportamiento para segregar las infecciones con las cepas, TcI/Colombiana, TcVI/CL o TcII/Y. En general, los huéspedes infectados con las cepas, TcI/Colombiana y TcII/Y mostraron patrones opuestos de reactividad con α-TcI TRYPO y α-TcII AMA. 

 

Los autores concluyeron que el método presentó un buen desempeño para el diagnóstico genotípico específico, con una exactitud global del 69% cuando el escenario población/prototipo incluía infecciones TcI, TcVI y TcII, y de 94% cuando sólo comprenden infecciones TcI y TcII. El método proporciona una herramienta factible para clasificar muestras de suero de huéspedes infectados con genotipos definidos de T. cruzi, apoyando el potencial de este método para el diagnóstico universal y la genotipificación específica de la infección por T. cruzi. El estudio fue publicado el 23 de marzo de 2017, en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.