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Combinación de prueba detecta infección latente de leishmaniasis

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 13 Sep 2022
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Imagen: El Promega Maxwell 16 purificación automatizada de ADN genómico, ARN o proteínas recombinantes de una amplia gama de tipos de muestras  (Fotografía cortesía de Fischer Scientific).
Imagen: El Promega Maxwell 16 purificación automatizada de ADN genómico, ARN o proteínas recombinantes de una amplia gama de tipos de muestras (Fotografía cortesía de Fischer Scientific).

Después de la infección con Leishmania infantum se puede desarrollar leishmaniasis cutánea o visceral, pero en la mayoría de los casos el huésped se convierte en un portador asintomático del parásito. Esta población clave de individuos con leishmaniasis latente puede sufrir una reactivación de la infección con desenlace severo en caso de inmunosupresión y puede contribuir a la transmisión de la enfermedad.

El impacto de la leishmaniasis en la salud pública se subestima actualmente en Europa, a pesar de que la infección por Leishmania es endémica en los países mediterráneos y se han notificado brotes de leishmaniasis humana en las últimas décadas, incluido el noreste de Italia. Una de las causas que contribuye a este descuido es que las pruebas diagnósticas disponibles presentan escasa sensibilidad en la identificación de leishmaniasis latente.

Microbiólogos de diagnóstico de la Universidad de Bolonia (Bolonia, Italia) y sus colegas inscribieron una cohorte de 145 voluntarios adultos que residían en una provincia seleccionada de Bolonia, con el objetivo de realizar una detección de infección asintomática por Leishmania. Para cada individuo, se recolectaron 10 mL de sangre periférica y se dividieron en tres tubos de ensayo; un tubo con ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) como anticoagulante, un tubo con heparina como anticoagulante y un tubo sin anticoagulante. El equipo definió como infección asintomática por Leishmania cada caso que dio positivo en al menos una de las pruebas de detección: PCR en tiempo real, Western Blot (WB) y/o ensayo de estimulación de sangre total (WBA).

La detección de IgG en suero de voluntarios, específico de Leishmania se evaluó empleando el kit Leishmania WESTERN BLOT IgG (LDBio Diagnostics, Lyon, Francia). Se evaluó WBA para estudiar la liberación de citocinas por parte de los leucocitos tras la estimulación con antígenos de Leishmania. La cuantificación de IL-2 se realizó utilizando Set Flex de Proteína Soluble Humana con Matriz de Microesferas Citométricas (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, EUA) y el método se realizó utilizando BD FACSCanto de esa empresa. Se extrajo ADN de Leishmania de 200 μL de sangre periférica con EDTA mediante un sistema de extracción de ADN semiautomático, utilizando el kit Maxwell 16 LEV Blood DNA en el instrumento Maxwell 16 (Promega, Madison, WI, EUA) para la detección de ADN parasitario en la sangre.

Los investigadores informaron que 23/145 voluntarios dieron positivo, lo que indica una prevalencia del 15,9 %; 15/145 sujetos dieron positivo a WB (10,3 %). En detalle, cuatro sujetos mostraron positividad a la banda p14 (26,5 %), siete a la banda p16 (47,0 %) y cuatro a las bandas p14 y p16 (26,5 %). Entre los 145 voluntarios incluidos en el estudio, seis individuos portaban ADN de leishmania en sangre periférica (4,1 %); la parasitemia fue baja, con una mediana de carga parasitaria de 8,24 × 10−1/mL de sangre. El WBA se utilizó para evaluar la respuesta mediada por células específicas de los voluntarios después de la estimulación sanguínea con antígenos específicos de Leishmania. De los 145 sujetos, 12 dieron positivo (8,3 %); estos individuos exhibieron un valor de IL-2 por encima del límite de positividad con una concentración mediana de IL-2 de 213 pg/mL.

Los autores concluyeron que la combinación de diferentes pruebas aumentó sustancialmente el rendimiento de la positividad en la detección de la infección latente por Leishmania. La combinación de pruebas que emplearon en este estudio parece ser efectiva para identificar con precisión la leishmaniasis latente en un área endémica. El estudio se publicó el 15 de agosto de 2022 en la revista PLoS Neglected Tropica Diseases.

 

 

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