Prueba en sangre determina la glutationa reducida y oxidada

El equipo utilizó muestras de sangre residual anónimas de 59 individuos sanos, 31 varones y 28 mujeres, con un rango de edad de 1 y 87 años, con una media de 25 años.

Los compuestos fueron separados por cromatografía líquida utilizando una columna Hypercarb (Thermo Scientific, Waltham, MA, EUA) a temperatura ambiente. Se detectaron los iones y fragmentos de GSH y GSSG mediante el espectrómetro de masas API 3000 de triple cuadrupolo (Perkin-Elmer; Waltham, MA, EUA). Las concentraciones finales de GSH y GSSG fueron expresadas en unidades de μmol/L de sangre total.

Los límites inferiores de detección (LLOD) fueron 0,4 μM de GSH y de 0,1 μM para GSSG y los límites inferiores de cuantificación (LLOQ) fueron 1,5 μM para GSH y de 0,1 μM para GSSG. Hubo una linealidad excelente tanto para GSH como para GSSG en los rangos de normalidad fisiológica, con coeficientes de variación, inter-e intra-ensayo, de 3,1% a 4,3% y una exactitud entre 95% y 101%. Las muestras derivadas son estables durante al menos tres años cuando se almacenan a -80°C y las muestras no derivadas durante al menos 24 horas a 4°C o a temperatura ambiente. Como un grupo, la concentración media ± desviación estándar de GSH fue de 900 ± 140 μM, de GSSG 1,17 ± 0,43 μM y la relación GSH/GSSG fue de 880 ± 370.

Los autores llegaron a la conclusión de que su método LC-MS/MS minimiza la variabilidad preanalítica a través de un procedimiento de una etapa de desproteinización y derivación, y las condiciones cromatográficas que eliminan la supresión de iones y aumentan la precisión y la sensibilidad. Las ventajas adicionales incluyen el requisito de muestras pequeñas, el procesamiento preanalítico simple y rápido y amplias posibilidades de automatización, lo que hace que este método sea ideal para la rutina y los ensayos clínicos a gran escala. El estudio fue publicado el 15 de junio de 2013, en la revista Journal of Chromatography B.

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Stanford University School of Medicine

Thermo Scientific

Perkin-Elmer