Prueba en sangre determina la glutationa reducida y oxidada

Los niveles disminuidos de glutationa (γ-glutamilcisteinilglicina, GSH) y la relación de GSH a la glutationa disulfuro (GSSG) pueden servir como indicadores importantes del estrés oxidativo y del riesgo de enfermedad.

Se desarrolló un método simple y sensible de cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) para la medición de GSH y GSSG en sangre total, el cual puede ser implementado fácilmente en los laboratorios clínicos.

Científicos de la Escuela Universitaria de Medicina de Stanford (CA, EUA) desarrollaron un método que minimiza la variabilidad preanalítica a través de un procedimiento de una etapa de desproteinización y derivación que evita la oxidación artefactual de GSH, y se adapta fácilmente a la clínica sin necesidad de restricciones excesivas en la manipulación o almacenamiento de las muestras. El equipo utilizó muestras de sangre residual anónimas de 59 individuos sanos, 31 varones y 28 mujeres, con un rango de edad de 1 y 87 años, con una media de 25 años.

Los compuestos fueron separados por cromatografía líquida utilizando una columna Hypercarb (Thermo Scientific, Waltham, MA, EUA) a temperatura ambiente. Se detectaron los iones y fragmentos de GSH y GSSG mediante el espectrómetro de masas API 3000 de triple cuadrupolo (Perkin-Elmer; Waltham, MA, EUA). Las concentraciones finales de GSH y GSSG fueron expresadas en unidades de μmol/L de sangre total.

Los límites inferiores de detección (LLOD) fueron 0,4 μM de GSH y de 0,1 μM para GSSG y los límites inferiores de cuantificación (LLOQ) fueron 1,5 μM para GSH y de 0,1 μM para GSSG. Hubo una linealidad excelente tanto para GSH como para GSSG en los rangos de normalidad fisiológica, con coeficientes de variación, inter-e intra-ensayo, de 3,1% a 4,3% y una exactitud entre 95% y 101%. Las muestras derivadas son estables durante al menos tres años cuando se almacenan a -80°C y las muestras no derivadas durante al menos 24 horas a 4°C o a temperatura ambiente. Como un grupo, la concentración media ± desviación estándar de GSH fue de 900 ± 140 μM, de GSSG 1,17 ± 0,43 μM y la relación GSH/GSSG fue de 880 ± 370.

Los autores llegaron a la conclusión de que su método LC-MS/MS minimiza la variabilidad preanalítica a través de un procedimiento de una etapa de desproteinización y derivación, y las condiciones cromatográficas que eliminan la supresión de iones y aumentan la precisión y la sensibilidad. Las ventajas adicionales incluyen el requisito de muestras pequeñas, el procesamiento preanalítico simple y rápido y amplias posibilidades de automatización, lo que hace que este método sea ideal para la rutina y los ensayos clínicos a gran escala. El estudio fue publicado el 15 de junio de 2013, en la revista Journal of Chromatography B.

Enlaces relacionados:

Stanford University School of Medicine

Thermo Scientific

Perkin-Elmer