Emplean novedosa inmunohistoquímica digital multiplexada en cortes de tejido

La heterogeneidad intratumoral se ha convertido en un reto fundamental para la aplicación de terapias e inmunohistoquímica (IHC), dirigidas que se utiliza para evaluar la heterogeneidad espacial de las proteínas; sin embargo, ha sido difícil cuantificar la abundancia de proteínas a intervalos dinámicos amplios y gran multiplexación.

 

Se ha desarrollado un método proteómico, con resolución espacial, basado en anticuerpos, con un “potencial para hacer códigos de barras” con el fin de cuantificar hasta 800 objetivos en una sola lámina de muestra fijada en formol e incluida en parafina (FFPE). Se perfeccionó un ensayo,  capaz de cuantificar la abundancia de proteínas en una región espacial predefinida de un corte de tejido, mediante el etiquetado de anticuerpos con oligos fotoescindibles, que son reconocidos por los códigos de barras fluorescentes y posteriormente se los expone a la luz UV enfocada.

 

Los científicos del Centro de Cáncer MD Anderson (Houston, TX, EUA) trabajaron con un corte de tejido FFPE montado en una lámina, de una empresa comercial, el cual estaba unido a un coctel multiplexado de conjugados anticuerpo-oligo, primarias, y que tiene una celda de flujo de microfluidos unida a la lámina. Mediante el uso de una simple modificación de un microscopio estándar, las regiones de interés fueron identificadas mediante microscopía de luz o fluorescencia y fueron iluminadas secuencialmente con luz UV para liberar los oligos. Después de cada ciclo de iluminación, se recolectó el eluyente y se analizó, obteniendo recuentos digitales que corresponden a la abundancia de cada proteína específica en las zonas iluminadas de forma secuencial.

 

Los anticuerpos fueron marcados con códigos de barras fluorescentes, nCounter, de la empresa comercial colaboradora (NanoString Technologies, Seattle, WA, EUA). El prototipo incluye componentes de imagen y de fluidos para capturar contexto espacial, y los instrumentos existentes nCounter proporcionan la cuantificación. Usando un dispositivo prototipo junto con un Sistema de Análisis nCounter, la empresa y sus colaboradores demostraron el recuento simultáneo de 30 objetivos proteicos diferentes, a través de una porción fija, montada en la lámina de tejido tumoral.

 

Las técnicas actuales multi-objetivo de IHC implican etapas de procesamiento secuenciales; Por lo tanto, cada adición de un objetivo aumenta el tiempo de manipulación y carga de trabajo, globales. Por el contrario, la tecnología novedosa de NanoString, analiza todos los analitos simultáneamente para acortar y simplificar las pruebas de análisis de datos y, al mismo tiempo, conserva una mayor capacidad de multiplexación y un intervalo de detección más amplio. Se espera que la tecnología sea compatible con los productos actuales y futuros, nCounter Vantage, para el análisis Biología 3D.

 

Joseph Beechem, PhD, vicepresidente de I&D en NanoString dijo: “Las nuevas tecnologías digitales de IHC de NanoString, combinan la alta multiplexación y cuantificación digital de los códigos de barras ópticos, de una sola molécula, con los conocimientos biológicos proporcionados por la localización de las proteínas. Durante el resto de este año, nuestro plan incluye el aumento del número de objetivos en nuestros ensayos, la mejora de la resolución de las imágenes y la exploración de su uso con otras aplicaciones de la Biología 3D”. El estudio fue presentado en el congreso anual de la Asociación Americana para la Investigación del Cáncer (AACR), celebrado del 16-20 de abril de, 2016, en Nueva Orleans, LA, EUA. 

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