Ensayos sensibles para analizar síndrome X frágil

El síndrome X frágil, la causa hereditaria más común de retraso mental y una causa frecuente de autismo, caracterizada por anormalidades del gen 1 X frágil de retraso mental (FMR1) que son difíciles de analizar.

 

Los estudios preclínicos de X frágil y de los trastornos relacionados con X Frágil se ven obstaculizados por la falta de métodos de bajo costo y sensibles pero simples; sin embargo, un nuevo desarrollo de un conjunto de ensayos que son robustos y lo suficientemente baratos para el uso rutinario, puede ser adecuado para el cribado inicial de los pacientes.

 

Los científicos del Instituto Nacional de Diabetes y Enfermedades Digestivas y Renales (Bethesda, MD, EUA) desarrollaron los ensayos que tienen la capacidad de amplificar alelos con hasta aproximadamente 1.000 repeticiones, incluso en muestras de pacientes que son mosaicos, es decir aquellos que tienen una mezcla de células con diferentes números de repeticiones. Los ensayos son lo suficientemente sensibles como para analizar muestras de saliva con purificación mínima. La prueba puede ser completada en un plazo similar a la de los últimos ensayos de diagnóstico comerciales en menos de 24 horas para determinar el tamaño de las repeticiones y/o el estado de metilación y en menos de 24 horas determinar el estado de interrupción y el porcentaje de metilación y son comparables en términos de los tiempos de operador requeridos.

 

Estos ensayos permiten detectar incluso pequeños cambios en la metilación del ADN, haciéndolos útiles en la búsqueda de nuevos medicamentos para revertir los efectos de la expansión de repeticiones. El ADN genómico de las líneas celulares fue preparado usando procedimientos estándar. Se recogió el ADN genómico, a partir de saliva humana, en un OGR-500 (Oragene, DNA Genotek, Kanata, ON, Canadá) y se purificó usando su reactivo prepIT-L2P. La cuantificación del ADN se realizó utilizando un espectrofotómetro Denovix DS-11 (DeNovix, Wilmington, DE, EUA). Un ensayo cuantitativo de reacción en cadena de la polimerasa del gen promotor de la metilación FMR1 (qMS-PCR) se realizó utilizando una máquina StepOne Plus PCR (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA). 

 

Karen Usdin, PhD, la investigadora principal y coautora del estudio, dijo: “Un análisis cuidadoso del número total de repeticiones, el número de interrupciones en la repetición de las vías, y el estado de metilación del gen FMR-1, es importante para una correcta comprensión del riesgo de un individuo de transmisión de los alelos más grandes a sus hijos y a su riesgo personal de patología de la enfermedad. Sin la capacidad de verificar el número de repeticiones CGG y el estado de metilación, es imposible poder diferenciar entre los cambios regulados bona fide por el desarrollo y los artefactos derivados de la inestabilidad en el número de repeticiones y de la metilación, comúnmente asociados con estas células”. El estudio fue publicado en línea en 1 de agosto de 2016, en la revista The Journal of Molecular Diagnostics.

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