Ensayos sensibles para analizar síndrome X frágil

 

Estos ensayos permiten detectar incluso pequeños cambios en la metilación del ADN, haciéndolos útiles en la búsqueda de nuevos medicamentos para revertir los efectos de la expansión de repeticiones. El ADN genómico de las líneas celulares fue preparado usando procedimientos estándar. Se recogió el ADN genómico, a partir de saliva humana, en un OGR-500 (Oragene, DNA Genotek, Kanata, ON, Canadá) y se purificó usando su reactivo prepIT-L2P. La cuantificación del ADN se realizó utilizando un espectrofotómetro Denovix DS-11 (DeNovix, Wilmington, DE, EUA). Un ensayo cuantitativo de reacción en cadena de la polimerasa del gen promotor de la metilación FMR1 (qMS-PCR) se realizó utilizando una máquina StepOne Plus PCR (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA). 

 

Karen Usdin, PhD, la investigadora principal y coautora del estudio, dijo: “Un análisis cuidadoso del número total de repeticiones, el número de interrupciones en la repetición de las vías, y el estado de metilación del gen FMR-1, es importante para una correcta comprensión del riesgo de un individuo de transmisión de los alelos más grandes a sus hijos y a su riesgo personal de patología de la enfermedad. Sin la capacidad de verificar el número de repeticiones CGG y el estado de metilación, es imposible poder diferenciar entre los cambios regulados bona fide por el desarrollo y los artefactos derivados de la inestabilidad en el número de repeticiones y de la metilación, comúnmente asociados con estas células”. El estudio fue publicado en línea en 1 de agosto de 2016, en la revista The Journal of Molecular Diagnostics.

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