Evalúan métodos para detección de malaria asintomática

Se conoce una infección asintomática de malaria como la parasitemia de malaria de cualquier densidad en ausencia de fiebre u otros síntomas agudos, en individuos que no han recibido tratamientos antipalúdicos recientes.

Los métodos sensibles para detectar las infecciones asintomáticas de la malaria son esenciales para poder identificar posibles depósitos de transmisión y obtener una evaluación exacta de la epidemiología de la malaria en áreas de baja endemicidad, y poder eliminar la malaria. Las técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para detectar los ácidos nucleicos del parásito (ADN o ARN), están entre los métodos moleculares más comúnmente utilizados.

Científicos de la Universidad Médica de China (Shenyang, China) y sus colegas, reclutaron a 1.005 individuos sanos (344 varones y 661 mujeres, edades 1-82 años) que viven en Kachin Sate, Myanmar, entre mayo y noviembre de 2015. Se tomaron dos muestras por punción digital; una fue procesada en un laboratorio de campo cercano y la otra en papel de filtro, que se secó y se almacenó. El estudio comparó tres métodos de detección molecular, en paralelo, a saber: la PCR anidada dirigida a los genes del ácido ribonucleico ribosómico (ARNr), la RT-PCR anidada para detectar el ARNr del parásito y la PCR de captura y ligadura (CLIP-PCR) para detectar el ARN de los parásitos.

Se prepararon y leyeron láminas de sangre en frotis delgado y gota gruesa, coloreadas con Giemsa. Para las láminas positivas, la densidad de parásitos se cuantificó con respecto a 500 glóbulos blancos (WBCs) en la gota gruesa, suponiendo que 1 μL de sangre contiene 8000 WBC. Se extrajo el ARN total y el ADN genómico de las muestras de sangre periférica. Se realizó una PCR anidada modificada (nD-PCR) basada en el gen rARN 18S. El círculo de 3 mm CLIP-PCR, de mancha de sangre seca, en papel de filtro Whatman 3 M, se perforó y se lisó con 100 μL de mezcla de lisis. Se utilizaron dos métodos de RT-PCR para detectar gametocitos de Plasmodium vivax en las muestras. Para la detección de gametocitos de P. vivax en todas las 1.005 muestras, se amplificaron todas las 645 bp del gen Pvs25, utilizando cebadores específicos para Pvs25-. La amplificación y la detección se realizaron en un aparato ABI 7500 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA).

La microscopia de luz detectó infecciones por Plasmodium en sólo el 1,19% de los residentes que albergaron los parásitos. CLIP-PCR tuvo un desempeñó ligeramente mejor y detectó infecciones por Plasmodium en el 1,89% de la población. Se logró una mejora adicional mediante PCR anidada para detectar el ADN del parásito, que detectó infecciones por P. vivax y P. falciparum en el 2,39% de los residentes. Sin embargo, la RT-PCR anidada para el rARN, detectó 187 individuos (18,61%) con infecciones por Plasmodium, siendo P. vivax la especie predominante (176 P. vivax, 5 P. falciparum y 6 infecciones mixtas por P. falciparum/P. vivax). De las 210 muestras positivas a Plasmodium, detectadas por todos los métodos moleculares, 115 fueron positivas a Pvs25, por reacción cuantitativa en cadena de polimerasa (qRT-PCR), lo que indica que una gran proporción de individuos asintomáticos eran portadores de gametocitos.

Los autores concluyeron que la RT-PCR anidada basada en la detección del rARN del parásito, en el estadio asexual fue la más sensible, con una sensibilidad más de seis veces mayor que los otros dos métodos moleculares de detección de parásitos. CLIP-PCR tiene una eficiencia mucho mayor, pero su sensibilidad en este estudio fue mucho menor que la de los otros métodosmoleculares. El estudio fue publicado el 20 de abril de 2017 en la revista Malaria Journal.