Amplificación isotérmica mediada por bucle discrimina la bacteria del pian

El pian, una enfermedad tropical desatendida causada por la bacteria Treponema pallidum subespecie pertinente, afecta predominantemente a niños que viven en comunidades rurales de bajos ingresos de regiones cálidas y húmedas.

Las manifestaciones clínicas del pian incluyen lesiones de la piel, los huesos y el cartílago, que progresan a lesiones destructivas graves si no se tratan. Las pruebas serológicas, que incluyen las pruebas de aglutinación de partículas para T. pallidum y las pruebas rápidas de reaginas en plasma, continúan siendo las herramientas de diagnóstico principales para el pian. Las pruebas serológicas más recientes para los puntos de atención han reemplazado los ensayos serológicos tradicionales de laboratorio en muchos entornos.

Un equipo internacional de científicos, que trabaja con la Universidad de Friburgo (Friburgo, Alemania), desarrolló una prueba molecular nueva para detectar simultáneamente T. pallidum y Haemophilus ducreyi basada en el desplazamiento del mediador de Amplificación Isotérmica Mediada por Bucle (LAMP). Validaron el ensayo LAMP para el T. pallidum y el H. ducreyi (TPHD-LAMP) mediante el análisis de 293 muestras clínicas de pacientes con lesiones similares al pian.

Se recogieron hisopos de personas con úlceras similares al pian y se colocaron en medio de transporte AssayAssure Multilock (Sierra Molecular, Princeton, NJ, EUA); luego se congelaron a -20°C hasta que se transportaron al laboratorio de Mast Diagnostica GmbH (Reinfeld, Alemania). El ADN se extrajo de las muestras usando el Kit Básico innuPREP MP A (Analytik Jena, Jena, Alemania). El ADN aislado se mantuvo congelado a -20°C hasta que se usó para la realización de pruebas LAMP bíplex de T. pallidum y H. ducreyi (TPHD-LAMP), y LAMP singleplex para T. pallidum y H. ducreyi y pruebas cuantitativas de reacción en cadena de la polimerasa (qPCR) .

El equipo detectó T. pallidum en 59 (20,1%) muestras, H. ducreyi en 155 (52,9%) muestras y coinfección por T. pallidum y H. ducreyi en 19 (6,5%) muestras usando qPCR. Cuando se analizaron con TPHD-LAMP, detectaron T. pallidum en 60 (20,5%) muestras y H. ducreyi en 163 (55,6%) muestras. Detectaron ambos objetivos en 12 (4,1%) muestras. Tomando qPCR como estándar de referencia, la sensibilidad diagnóstica del ensayo TPHD-LAMP para T. pallidum fue del 84,7% y la especificidad del 95,7%. Para H. ducreyi, la sensibilidad del ensayo TPHD-LAMP fue del 91,6% y la especificidad del 84,8%.

Los autores concluyeron que su nuevo ensayo proporcionó una confirmación molecular rápida del ADN de T. pallidum y H. ducreyi y que este método podría ser adecuado para su uso en los puntos de atención. TPHD-LAMP podría apoyar la erradicación del pian mejorando el acceso a las pruebas de diagnóstico molecular a nivel de hospital de distrito. El estudio fue publicado en la edición de febrero de 2020 de la revista Emerging Infectious Diseases.

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