Extracción automatizada del tejido FFPE para pruebas de VPH de alto riesgo

Están disponibles varias plataformas de pruebas para el VPH-AR; Sin embargo, se necesitan métodos, alternativos, eficaces, automatizados.

El virus del papiloma humano de alto riesgo (VPH-AR) es ahora un agente etiológico bien establecido en un subconjunto de carcinomas escamocelulares de cabeza y cuello (CECC) cuya incidencia está en aumento, particularmente en relación con el carcinoma escamocelular de la orofaringe (OPSCC), lo que demuestra una asociación con virus transcripcionalmente activos, en hasta el 80% de los tumores.

Los patólogos del Hospital General de Massachusetts (Boston, MA, EUA) recolectaron 62 muestras de archivo de muestras fijadas en formol e incluidas en parafina (FFPE) de CECC. En general, el OPSCC representó un poco más de la mitad (55%) de los CECC analizados. Estas muestras fueron preparadas utilizando el sistema automatizado por desparafinación y deshidratación, seguido por la lisis del tejido. Se evaluaron muestras FFPE correspondientes para VPH-AR mediante hibridación in situ (ISH) y p16 por inmunohistoquímica. Los casos discrepantes fueron definidos usando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

Los científicos utilizaron la plataforma automatizada Roche, cobas 4800 (Roche Diagnostics, Risch-Rotkreuz, Suiza), que consiste en un instrumento automático para la preparación de muestras y extracción de ADN seguido por y acoplado, a un termociclador y analizador para el desempeño de la PCR en tiempo real y la posterior detección de secuencias de ADN objetivo. La expresión inmunohistoquímica de p16 fue evaluada desparafinizando cortes de FFPE de 5μm de CECC y llevando a cabo la recuperación de antígenos mediante el protocolo Leica Bond (Leica Biosystems, Buffalo Grove, IL, EUA).

Los investigadores encontraron que 32/62 (52%) de los tumores fijados con formol e incluidos en parafina dieron resultados positivos para el VPH-AR usando el cobas. Hubo 28/32 (88%) de los casos donde el subtipo encontrado fue VPH 16 y 12% (4/32) donde se encontraron otros subtipos de VPH-AR. Las pruebas correspondientes con ISH fueron concordantes en el 92% (57/62) de los casos. En comparación con el estándar de definición por PCR, hubo tres casos de falsos positivos por cobas. Para el OPSCC, el cobas tuvo valores predictivos positivos y negativos del 100%, mientras que para los no-OPSCC, el valor predictivo positivo, fue del 57% y el valor predictivo negativo fue del 100%.

Los autores concluyeron que la concordancia en el estado de CECC-VPH-AR entre el cobas y la ISH fue superior al 90%. El cobas demostró una sensibilidad del 100% y una especificidad del 91% para la detección del VPH-AR. Los científicos dijeron que las ventajas que favorecen el cobas incluyen su automatización, la eficiencia de costos, los resultados objetivos y la facilidad de ejecución. El estudio fue publicado en la edición digital de la revista Archives of Pathology & Laboratory Medicine.

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Massachusetts General Hospital 
Roche Diagnostics
Leica Biosystems