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Investigan biomarcadores de renovación de colágeno en enfermedad de Crohn

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 06 Jul 2022
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Imagen: El lector de microplacas Versamax ELISA para mediciones de absorbancia visible entre 340 nm y 850 nm (Fotografía cortesía de Molecular Devices)
Imagen: El lector de microplacas Versamax ELISA para mediciones de absorbancia visible entre 340 nm y 850 nm (Fotografía cortesía de Molecular Devices)

La enfermedad de Crohn (EC) es una enfermedad inflamatoria ulcerativa crónica que afecta principalmente al tracto gastrointestinal (GI) y se caracteriza por una respuesta inmunitaria inapropiada y descontrolada que supuestamente es desencadenada por el microbioma intestinal en individuos genéticamente susceptibles.

Los colágenos son importantes para mantener la integridad y la estructura epiteliales y la fuerza de tensión del tejido intestinal. El tipo IV es el colágeno más abundante de la membrana basal, mientras que los colágenos tipo I y III son los colágenos más abundantes de la matriz intersticial, que se asocian directamente con el epitelio intestinal.

Los gastroenterólogos del Centro Médico Universitario de Groningen (Groningen, Países Bajos) recolectaron muestras de suero de 101 pacientes con EC. Las muestras se recolectaron en el período de febrero de 2011 a diciembre de 2018 y se almacenaron a -80 °C. Las clasificaciones se basaron en datos clínicos y se confirmaron objetivamente mediante endoscopias disponibles retrospectivamente (imágenes, informes), informes histopatológicos (p. ej., de resecciones intestinales) e información radiológica (p. ej., imágenes de resonancia magnética o tomografía computarizada).

Los investigadores midieron los biomarcadores serológicos de la formación de colágeno de tipo III y IV (PRO-C3, PRO-C4) y la metaloproteinasa de matriz (MMP) o la degradación de colágeno de tipo I, III, IV y VI (C1M, C3M, C4M, C4G, C6Ma3) mediada por granzima-B (GrzB) utilizando ensayos de huellas dactilares de proteínas neo-epítopo. Los fragmentos de neoepítopos de la síntesis y degradación de la matriz extracelular (ECM) se midieron mediante ensayos de huellas dactilares de proteínas con ELISA competitivo en fase sólida. Los ensayos se basaron en colorimetría o quimioluminiscencia.

Se aplicó un lector de ELISA VersaMAX (Molecular Devices, San Jose, CA, EUA) para leer las densidades ópticas a 450 y 650 nm. Para los ensayos de quimioluminiscencia, se agregó BM Chemiluminescence ELISA Substrate (Merck, St. Louis, MO, EUA) como 100 μL por pocillo. A continuación, las placas se agitaron a 300 rpm mientras se incubaban durante 3 minutos a 20 °C. Se aplicó un lector de placas de fluorescencia Fluoroskan FL (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA) para leer la emisión de luz a 1.000 milisegundos sin filtro.

El equipo informó que C1M, C3M y C4M se redujeron significativamente en pacientes con enfermedad estenosante (Montreal B2). Esto diferenció con precisión a estos pacientes de los pacientes con enfermedad no estenosante, no penetrante (B1) o penetrante (B3). Los investigadores también vieron que la proporción de formación/degradación de colágeno tipo IV (PRO-C4/C4M) demostró una alta capacidad de discriminación (B1/B2: AUC = 0,90; B1/B3: AUC = 0,87). Además, los niveles basales más altos de C1M y C4G se relacionaron con un mayor riesgo de progresión de la enfermedad penetrante (C4G: HR, 1,71).

Los autores concluyeron que la degradación elevada del colágeno tipo I, III y IV y la formación excesiva (relativa) de colágeno tipo IV se asocian fuertemente con la EC estenosante. Los fragmentos de colágeno tipo I y IV muestran un potencial predictivo del riesgo de progresión de la enfermedad penetrante. Estos biomarcadores pueden convertirse en herramientas valiosas para la detección y predicción de la EC estenosante y penetrante. El estudio se publicó el 6 de junio de 2022 en la revista Alimentary Pharmacology & Therapeutics .

Enlaces relacionados:
Centro Médico Universitario de Groningen
Molecular Devices
Merck
Thermo Fisher Scientific

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