Prueba de campo para Zika combina componentes de PCR en una sola unidad

Una prueba prototipo de campo, basada en la PCR, para la detección del virus Zika (ZIKV) incorpora todos los componentes necesarios y proporciona resultados exactos en sólo 40 minutos.

 

Los diagnósticos rápidos y confiables para el ZIKV son vitales porque los individuos, infectados por el ZIKV, no muestran síntomas o muestran síntomas inespecíficos, similares a otras infecciones virales. Puesto que los inmunoensayos carecen de sensibilidad y selectividad adecuada y no son capaces de identificar el estado activo de la infección, el diagnóstico molecular es un medio eficaz para detectar el ZIKV, poco después de la infección y durante todo el embarazo.

 

Investigadores de la Universidad de Pensilvania (Filadelfia, EUA) describieron recientemente un análisis muy sensible, de amplificación isotérmica, mediada por bucle (RT-LAMP), de transcripción inversa, para la detección rápida de ZIKV. La ventaja de usar el procedimiento de RT-LAMP es que, si bien, requiere que la muestra se mantenga a una temperatura específica, no exige que se hagan ciclos a través de múltiples cambios de temperatura precisos, como en la RT-PCR. Por otro lado, la RT-LAMP requiere cebadores de ADN más altamente especializados que los requeridos por la RT-PCR.

 

Para tratar el problema de los cebadores, los investigadores identificaron regiones altamente conservadas del genoma del virus Zika que eran divergentes de otros patógenos conocidos. Entonces diseñaron cebadores apropiados para reconocer esta secuencia. El equipo de investigadores diseñó un sistema de bajo costo, para los puntos de atención, que consistía en un casete de diagnóstico y un procesador. El casete aísla, concentra y purifica los ácidos nucleicos a partir de muestras de saliva de un paciente y después lleva a cabo la amplificación enzimática. Los resultados del análisis se indican mediante el cambio en el color de un colorante, que fue inspeccionado visualmente. Para el control térmico del casete, utilizaron una taza calentada químicamente - adaptada de los kits de raciones militares - sin necesidad de energía eléctrica.

 

Los investigadores demostraron la utilidad de este nuevo sistema de diagnóstico POC mediante la detección del ZIKV en muestras orales con sensibilidad de cinco unidades formadoras de placas (UFP), en menos de 40 minutos. Esta tecnología, de bajo costo (se calcula que cuesta alrededor de dos dólares por dispositivo de prueba) es particularmente adecuada para entornos de escasos recursos, donde los laboratorios centralizados, los fondos y el personal capacitado son escasos, y para el uso en consultorios médicos, clínicas y en la casa.

 

“Nuestro trabajo representa una prueba de concepto en esta etapa”, dijo el autor contribuyente, el Dr. Haim Bau, profesor de ingeniería mecánica y mecánica aplicada de la Universidad de Pensilvania. “Antes de que el ensayo se puede adaptar para uso médico, hay que experimentar con las muestras de los pacientes y asegurar que nuestro ensayo y el sistema coincidan con el desempeño del patrón de oro y opere de manera reproducible y confiable. Tenemos la suerte de tener colegas dedicados en regiones endémicas listas para que nos ayuden en esta tarea”.

 

La prueba de campo ZIKV se describe en detalle en la edición digital, de junio 16 de 2016, de la revista Analytical Chemistry.

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