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24 ene 2022 - 27 ene 2022

Prueba sensible PCR predice la respuesta al tratamiento en los cánceres metastásicos de cabeza y cuello

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 13 Jul 2021
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Imagen: Imagen de microfotografía de cáncer de orofaringe asociado al virus del papiloma humano (VPH+ OPSCC). El tejido se coloreó para mostrar la presencia del virus mediante hibridación in situ (Fotografía cortesía de Wikimedia Commons)
Imagen: Imagen de microfotografía de cáncer de orofaringe asociado al virus del papiloma humano (VPH+ OPSCC). El tejido se coloreó para mostrar la presencia del virus mediante hibridación in situ (Fotografía cortesía de Wikimedia Commons)
Un ensayo basado en PCR digital por gotitas (ddPCR), desarrollado recientemente para el ADN tumoral circulante (ADNtc) del virus del papiloma humano VPH16 (que es responsable de casi el 90% de los cánceres de orofaringe con VPH positivo) predice la respuesta al tratamiento en el carcinoma escamocelular metastásico de la orofaringe, relacionado con el virus del papiloma humano (VPH +) (OPSCC).

Los carcinomas escamocelulares de cabeza y cuello (HNSCC) constituyen 3 a 5% de todas las neoplasias malignas en todo el mundo y hay aproximadamente 600.000 nuevos casos diagnosticados anualmente. La mayoría de los pacientes con HNSCC presentan enfermedad avanzada local o regionalmente en el momento del diagnóstico. A pesar de la creciente incidencia de VPH+ OPSCC, el tratamiento de la enfermedad metastásica sigue siendo paliativo en lugar de curativo. Incluso con nuevos tratamientos como la inmunoterapia, las tasas de respuesta son bajas y pueden retrasarse, mientras que incluso la progresión leve del tumor ante una terapia ineficaz puede provocar una muerte rápida. Los biomarcadores en tiempo real de la respuesta a la terapia podrían mejorar los resultados al orientar el cambio temprano de la terapia en el contexto metastásico.

Los investigadores de la Universidad de Michigan (Ann Arbor, EUA) recurrieron a una prueba de PCR sensible de biopsia líquida para la detección de dichos biomarcadores. La prueba de PCR clásica lleva a cabo una reacción por muestra única. El método de PCR digital (dPCR) también lleva a cabo una única reacción dentro de una muestra, sin embargo, la muestra se separa en un gran número de particiones y la reacción se lleva a cabo en cada partición individualmente. Esta separación permite una recolección más confiable y una medición sensible de las cantidades de ácido nucleico. Se ha demostrado que el método dPCR es útil para estudiar variaciones en las secuencias de genes, como las variantes del número de copias y las mutaciones puntuales, y se usa de forma rutinaria para la amplificación clonal de muestras para la secuenciación de próxima generación.

La PCR digital por gotitas (ddPCR) es una variación de la dPCR en la que una reacción de muestra de 20 microlitros que incluye cebadores de ensayo y sondas Taqman o un colorante intercalante, se divide en aproximadamente 20.000 gotas de aceite del tamaño de nanolitros mediante una técnica de emulsión de agua y aceite, termociclada para punto final en una placa de PCR de 96 pozos y lectura de la amplitud de fluorescencia para todas las gotitas en cada pozo de muestra en un citómetro de flujo de gotas.

Al iniciar el estudio actual, los investigadores plantearon la hipótesis de que: 1) una prueba de ADNtc de HPV16 ofrecería un ensayo preciso para la detección de VPH + OPSCC y 2) el ensayo predeciría la enfermedad progresiva antes de la obtención de imágenes radiográficas en pacientes sometidos a tratamiento para el VPH+ OPSCC, recurrente o metastásico. Por lo tanto, desarrollaron y validaron analíticamente un ensayo de ddPCR altamente sensible y específico para la cuantificación absoluta del ADNtc del VPH a partir de muestras de plasma y realizaron una evaluación de la utilidad clínica en una cohorte de pacientes prospectiva y longitudinal.

Para este estudio, los investigadores analizaron más de 100 muestras tomadas durante casi dos años de 16 pacientes con cánceres avanzados que dieron positivo al VPH16. Siete de los pacientes fueron tratados con regímenes de inmunoterapia. Once pacientes se sometieron a un tratamiento que incluyó quimioterapia. Los resultados revelaron que los niveles crecientes de ADN tumoral circulante positivo para VPH después de un curso de tratamiento eran un fuerte indicador de que el cáncer no respondía al tratamiento. Además, se descubrió que el ADN del tumor se podía detectar meses antes que el crecimiento del tumor, que se podía medir en los exámenes de imagenología.

“Actualmente, la única forma en que los médicos saben si un tratamiento funciona es que el paciente se someta a un examen de imagenología cada pocos meses para ver si sus tumores se reducen”, dijo el autor colaborador, el Dr. Paul Swiecicki, profesor asistente de oncología médica en la Universidad. de Michigan. “Y esto no es completamente exacto, ya que algunos cánceres muestran lo que llamamos pseudoprogresión, donde un tratamiento exitoso en realidad agranda los tumores antes de encogerlos. Nuestro objetivo era desarrollar una prueba que pudiera decirnos si es probable que un tratamiento funcione después de un ciclo único “.

El estudio fue publicado en la edición digital del 22 de junio de 2021 de la revista Oncotarget.

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