Coloración con inmunohistoquímica dual de la médula ósea detecta la leucemia de células peludas

La leucemia de células peludas (HCL, por sus siglas en inglés) es un trastorno linfoproliferativo de células B caracterizado por un inmunofenotipo distinto (positivo para CD19, CD20, PAX5, CD22, CD11c, CD25, CD103, CD123 y CD200). El análisis inmunofenotípico por citometría de flujo (CF) se considera el estándar de oro para el diagnóstico de las HCL.

Sin embargo, se pueden usar tanto la CF como la inmunohistoquímica (IHC) para determinar estos marcadores. Aunque tanto la biopsia como el aspirado de médula ósea de trefina son vitales para evaluar la extensión de la infiltración a la médula ósea, en algunos casos no se puede obtener un aspirado celular debido a la fibrosis extensa (es decir, “punción seca”).

Los hematólogos del Instituto Nacional del Cáncer de los EUA (Bethesda, MD, EUA) y sus colegas, analizaron 148 muestras de biopsia de médula ósea (123 pacientes masculinos y 25 femeninos; edad media, 59,8 años; rango, 25-81 años) recolectados de pacientes evaluados para HCL entre 2016 y 2017. Las muestras se colorearon dentro de las 24 horas posteriores a la recolección con un panel de anticuerpos. Posteriormente, las muestras se lavaron con solución salina tamponada con fosfato y se tiñeron durante 30 minutos a temperatura ambiente con combinaciones de anticuerpos en cócteles de ocho colores.

La citometría de flujo multiparamétrica se realizó usando CD19, CD20, CD22, CD11c, CD25, CD103, CD123, cadenas livianas de superficie, CD5 y CD23. Paralelamente, la IHC de la médula ósea se realizó con PAX5/CD103 y PAX5/coloraciones de IHC dual fosfatasa alcalina resistente a tartrato (TRAP). Las muestras fueron procesadas en el FACSCanto II (BD Biosciences, San José, CA, EUA). Las biopsias de médula ósea se fijaron en fijador B-Plus y se decalcificaron en Rapid Cal Immuno (BBC Biochemical, Vernon, WA, EUA) y se incluyeron en parafina con el procesador Tissue Tek (Sakura Finetek, Torrance, CA, EUA).

Los científicos informaron que la sensibilidad general de las coloraciones duales de IHC fue del 81,4%, el valor predictivo positivo fue del 100% y el valor predictivo negativo fue del 81,7%. Todos los casos positivos para IHC coincidieron con los datos de citometría de flujo, incluso cuando la carga de HCL era extremadamente baja en las muestras de citometría de flujo (tan bajo como 0,02% de todas las células linfoides). La coloración PAX5/CD103 con doble IHC generó una tinción nuclear marrón para PAX5 y una coloración roja membranosa y citoplasmática para CD103. La tinción PAX5/TRAP dual con IHC mostró resultados similares para PAX5 y una coloración roja membranosa y citoplasmática para TRAP.

Los autores concluyeron que la tinción con IHC dual es una herramienta sensible para detectar la HCL, incluso en casos con mínima afectación de la enfermedad. Todos los casos positivos para IHC coincidieron con los datos de la CF, incluso cuando la carga de HCL era extremadamente baja. Solo el 18,3% de los casos con doble IHC negativo fueron positivos para la participación de bajo nivel mediante análisis de CF. La coloración PAX5/CD103 dual con IHC fue ligeramente más sensible que la coloración de IHC PAX5/TRAP dual. El estudio fue publicado en la edición de marzo de 2020 de la revista American Journal of Clinical Pathology.

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Instituto Nacional del Cáncer de los EUA
BD Biosciences
BBC Biochemical
Sakura Finetek