Se detectan los virus Banna mediante amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción reversa

Se ha aislado el virus Banna (BAV) de un grupo diverso de vertebrados e invertebrados, incluidos mosquitos, garrapatas, ganado y cerdos de diferentes regiones de China, Vietnam e Indonesia. Se considera que el BAV es un patógeno emergente que puede producir infecciones humanas con posible manifestación de fiebre y encefalitis viral.

La amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa (RT-LAMP) es un método de amplificación de ácidos nucleicos que amplifica el ADN del ARN transcrito de manera inversa utilizando la polimerasa de ADN de desplazamiento de cadena en condiciones isotérmicas. Debido a su rapidez, simplicidad, sensibilidad y especificidad, la RT-LAMP se ha aplicado con éxito para la detección de varios virus de ARN.

Los científicos del Instituto de Virología de Wuhan (Wuhan, China) diseñaron un conjunto de seis cebadores específicos para identificar el segmento 12 del BAV y se desarrolló y comparó el ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa (RT-LAMP) con el método convencional de reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa (RT-PCR). El equipo utilizó varias células y muestras enriquecidas para ensayar el método RT-LAMP.

Al ejecutar el ensayo RT-LAMP, se utilizó un kit de amplificación de ARN DEAOU (RT-LAMP) (DEAOU, Guangzhou, China). La amplificación de RT-PCR en un solo paso para BAV se realizó con el kit Prime-Script RT-PCR de un solo paso Ver.2 (Takara, Dalian, China). El ARN se extrajo de 140 µL de sobrenadante de cultivo de células C6/36 infectadas con BAV, suero humano enriquecidas con BAV o muestras de homogeneizado de mosquitos filtrados utilizando el kit QIAamp Viral RNA Mini (Qiagen, Hilden, Alemania).

El equipo informó que la amplificación del ensayo RT-LAMP se puede obtener en 40 minutos a 65°C. Los resultados de la especificidad mostraron que solo se amplificaron los ARN objetivo de los BAV, incluidos los genotipos A, B y C, y el ensayo demostró una sensibilidad de 3,6 × 10−2 UFP/mL, que fue mayor que la medición por RT-PCR convencional. Se presentó una buena confiabilidad para el ensayo en la evaluación adicional para el ARN de BAV a partir de suero diluido en serie del BAV y 47 muestras de mosquitos de campo.

Los autores concluyeron que habían desarrollado con éxito un ensayo RT-LAMP para la detección del BAV, que proporciona una nueva prueba de diagnóstico molecular potencial para el BAV que podría aplicarse en el campo o la clínica en el futuro y que podría contribuir a la preparación para futuros brotes de una endemia de BAV, especialmente para regiones con recursos disponibles limitados. El estudio fue publicado en línea el 2 de noviembre de 2018 en la revista International Journal of Infectious Diseases.

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