Novedoso método prepara muestras de tejido para análisis de proteínas

De cada donante se congeló inmediatamente, en nitrógeno líquido, una porción de tejido pulmonar y la otra pieza se fijó usando la técnica HOPE o Efecto de Protección con solvente orgánico mediado con buffer de ácido glutámico-Hepes (DCS Diagnostics; Hamburgo, Alemania).

Para el análisis proteómico las muestras fijadas de pulmón con HOPE y las congeladas con nitrógeno líquido, fueron homogenizadas, sonicadas y centrifugadas. Después de calcular el contenido de proteínas, éstas fueron digeridas y enriquecidas con fosfopéptidos. Los péptidos fueron analizadas en un sistema UltiMate 3000 RSLC nano LC conectado a un espectrómetro de masas LTQ Orbitrap Velos Pro (Thermo Scientific, Waltham, MA, EUA).

El equipo encontró que en contraste con las muestras congeladas en nitrógeno, la fijación HOPE conserva bien la estructura de los tejidos y así, por ejemplo, las vesículas pulmonares se pueden ver con más claridad. Ellos utilizaron la espectrometría de masas con el fin de caracterizar las proteínas que estaban presentes en el tejido. El proteoma derivado de este estudio nos dice mucho sobre el estado de salud de los tejidos. Los científicos fueron un paso más allá y también investigaron el así llamado fosfoproteoma que son todas las moléculas de proteína en la célula que normalmente están activadas o desactivadas. Saber qué proteínas están activas contribuye al diagnóstico de enfermedades y puede ayudar a identificar objetivos para nuevos medicamentos. Los resultados son muy prometedores: la fijación HOPE no sólo conserva la estructura del tejido, sino que es igual de adecuada para la proteómica y la fosfoproteómica que la congelación con nitrógeno líquido.

Lothar Jänsch, PhD, un profesor y autor principal del estudio, dijo: “En base a nuestros resultados, recomendamos a HOPE como una estrategia de fijación para las clínicas y bancos biológicos que participan activamente en la mejora de los diagnósticos y las terapias”. El equipo de investigadores aplicó este nuevo método también en estudios sobre la enfermedad de los legionarios, una enfermedad infecciosa que es causada por bacterias y se asocia con neumonía. Los autores recomiendan HOPE generalmente como el “fijador de elección”, para los estudios, con el objetivo de describir las características moleculares de los tejidos humanos a nivel de sistemas. La fijación HOPE abre vías prometedoras para una mejor comprensión de las enfermedades humanas y la solución perspectiva de las necesidades de análisis clínicos personalizados. El estudio fue publicado el 7 de abril de 2014, en revista Journal of Proteome Research.


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Helmholtz Centre for Infection Research

DCS Diagnostics

Thermo Scientific