Inmunoanálisis múltiplex de microesferas identifica tres infecciones por flavivirus

La propagación explosiva del virus Zika (ZIKV) y las complicaciones asociadas en las regiones endémicas de flavivirus subrayan la necesidad de pruebas de serodiagnóstico sensibles y específicas para poder diferenciar el ZIKV, el virus del dengue (DENV) y otras infecciones por flavivirus.

ZIKV es miembro del género Flavivirus de la familia Flaviviridae, que incluye varios virus patógenos transmitidos por mosquitos en diferentes serocomplejos. Los cuatro serotipos del virus del dengue (DENV) pertenecen al serocomplejo DENV; el Virus del Nilo Occidental (VNO) y el virus de la encefalitis japonesa (JEV) para el serocomplejo JEV; el virus de la fiebre amarilla (YFV), como un solo miembro, y el ZIKV.

Los especialistas en medicina tropical de la Universidad de Hawái en Manoa (Honolulu, HI, EUA) y sus colegas desarrollaron un inmunoensayo de microesferas IgG multiplex de alto rendimiento (MIA) utilizando las proteínas NS1 del DENV1-DENV4, ZIKV y el virus del Nilo Occidental (VNO) para analizar muestras de casos confirmados por reacción de cadena de la polimerasa de transcripción inversa, incluyendo infecciones primarias por DENV1, DENV2, DENV3, WNV y ZIKV, infección secundaria por DENV e infección por ZIKV con infección previa por DENV.

El gen NS1 (que corresponde a los residuos de aminoácidos 1–352) del ZIKV (cepa HPF2013) con una etiqueta His en el extremo C se optimizó en el codón (Integrated DNA Technologies, Coralville, IA, EUA). Seis proteínas NS1 purificadas, albúmina de suero bovino (BSA) y PBS (como control de antígeno negativo) fueron acopladas individualmente en ocho tipos de microesferas carboxiladas magnéticas que contenían diferentes fluoróforos (MagPlexTM-C) (Luminex Corporation, Austin, TX, EUA) utilizando el proceso de carbodiimida en dos pasos a temperatura ambiente. Los inmunoensayos de microesferas (MIA) fueron realizados y leídos por una máquina Luminex 200. Se realizaron ensayos inmunosorbentes ligados a enzimas para DENV-1, DENV-2, DENV-3 y ZIKV-NS1 IgG.

Los científicos informaron que una combinación de cuatro DENV NS1 IgG MIA reveló una sensibilidad del 94,3% y una especificidad del 97,2% para detectar la infección por DENV. Los MIA de ZIKV y WNV NS1 IgG tuvieron una sensibilidad/ especificidad de 100%/87,9% y 86,1%/78,4%, respectivamente. Se encontró una correlación positiva entre las lecturas de ELISA y MIA para los diferentes NS1 ensayados. Con base en la proporción de la intensidad de fluorescencia mediana relativa de ZIKV NS1 a DENV1 NS1, el IgG MIA puede diferenciar la infección por ZIKV de la infección previa por DENV y de la infección secundaria por DENV con una sensibilidad de 88,9% –90,0% y una especificidad de 91,7% –100,0%.

Los autores concluyeron que el ensayo multiplex y de alto rendimiento podía ser aplicado al serodiagnóstico y la vigilancia serológica de las infecciones por DENV, ZIKV y WNV en regiones endémicas. El estudio se publicó el 23 de agosto de 2019 en la revista PLOS Neglected Tropical Diseases.

Enlace relacionado:
Universidad de Hawái en Manoa
Integrated DNA Technologies
Luminex Corporation