Prueba basada en CRISPR diagnostica con mayor rapidez infección fúngica mortal

El diagnóstico de la NPJ normalmente requiere procedimientos invasivos como muestras de lavado broncoalveolar (LBA), que pueden ser difíciles de obtener. Si bien los hisopos orofaríngeos y el suero podrían ofrecer una alternativa más sencilla, los métodos de diagnóstico actuales para esta causa principal de neumonía fúngica se han mantenido prácticamente sin cambios durante décadas, lo que deja a muchos pacientes sin diagnósticos rápidos o definitivos. Ahora, un nuevo estudio publicado en el Journal of Clinical Investigation sugiere que el uso de la tecnología CRISPR (repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmente interespaciadas) podría mejorar la sensibilidad diagnóstica, lo que permitiría detectar con precisión P. jirovecii utilizando hisopos y muestras de suero.

El equipo de investigación de la Universidad de Tulane (Nueva Orleans, LA, EUA) desarrolló una RT-PCR ultrasensible combinada con un ensayo CRISPR, que demostró una alta especificidad para infecciones activas en hisopos de bebés, LBA de adultos y muestras de suero. Utilizaron un ensayo RT-PCR CRISPR para analizar las transcripciones de P. murina en ARN pulmonar, LBA y suero de ratones de tipo salvaje y Rag2–/– a las 2, 4 y 6 semanas después de la infección. Para los estudios en humanos, el equipo optimizó el ensayo RT-PCR CRISPR para detectar transcripciones de P. jirovecii en hisopos orofaríngeos de bebés, así como en suero de adultos y muestras de LBA de individuos infectados y no infectados. Sus hallazgos mostraron que el ensayo de P. murina fue altamente efectivo para detectar ARN de Pneumocystis en el suero de ratones infectados durante el curso de la infección.

El ensayo CRISPR utilizado en hisopados orofaríngeos en bebés identificó infecciones por P. jirovecii con una sensibilidad significativamente mayor (96,3 % frente a 66,7 %) y una especificidad (100 % frente a 90,6 %) en comparación con el método tradicional RT-qPCR. Además, el ensayo CRISPR logró una mayor sensibilidad que la RT-qPCR (93,3 % frente a 26,7 %) en muestras de suero de adultos. Dado que los hisopados se recogen comúnmente de pacientes pediátricos con neumonía y el suero es más fácil de obtener que el LBA, los investigadores concluyeron que su ensayo basado en CRISPR podría ofrecer un diagnóstico más preciso y oportuno tanto para pacientes pediátricos como adultos con infecciones por P. jirovecii , reduciendo la necesidad de muestras invasivas de LBA.